ஜியார்டியா டியோடெனம் என்பது ஒரு ஒட்டுண்ணி உயிரினமாகும், இது ஜியார்டியாசிஸை ஏற்படுத்துகிறது, இது வயிற்றுப்போக்கின் மருத்துவ அறிகுறிகளைக் கொண்ட இளம் குழந்தைகளுக்கு குறிப்பாக பொதுவான குடல் தொற்று ஆகும்.எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் ஜி. டியோடெனலிஸ், உள்செல்லுலர் ஒலிகோமரைசேஷன் போன்ற ரிசெப்டர் 3 (என்எல்ஆர்பி3) பிணைப்பு நியூக்ளியோடைட்களை செயல்படுத்துவதைத் தூண்டுகிறது மற்றும் எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் வெசிகல் (ஈவி) சுரப்பு மூலம் ஹோஸ்ட் அழற்சி எதிர்வினைகளை ஒழுங்குபடுத்துகிறது என்று நாங்கள் முன்பு தெரிவித்தோம்.இருப்பினும், இந்த செயல்பாட்டில் ஈடுபட்டுள்ள நோய்க்கிருமி-தொடர்புடைய டியோடெனோகாக்கல் EV (GEV) இன் சரியான மூலக்கூறு வடிவங்கள் மற்றும் ஜியார்டியாசிஸில் NLRP3 இன் இன்ஃப்ளமேஸமின் பங்கு ஆகியவை தெளிவுபடுத்தப்பட வேண்டும்.
மறுசீரமைப்பு யூகாரியோடிக் வெளிப்பாடு பிளாஸ்மிட்கள் pcDNA3.1(+)-alpha-2 மற்றும் GEV இல் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டின்கள் கட்டப்பட்டு, மவுஸ் முதன்மை பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களாக மாற்றப்பட்டு, அழற்சி இலக்கு மூலக்கூறு காஸ்பேஸ்-1 ஐ அளவிடுவதன் மூலம் கண்டறியப்பட்டது.p20 வெளிப்பாடு நிலை திரையிடப்பட்டது..G. டியோடெனலிஸ் ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன்கள் முதலில் NLRP3 இன்ஃப்ளமஸம் (NLRP3, ப்ரோ-இன்டர்லூகின்-1 பீட்டா [IL-1β], ப்ரோ-காஸ்பேஸ்-1 மற்றும் காஸ்பேஸ்-1 p20), IL சுரப்பை அளவிடுவதன் மூலம் அடையாளம் காணப்பட்டன.1β அளவுகள், அப்போப்டொடிக் ஸ்பாட் புரதம் (ASC) ஒலிகோமரைசேஷன் நிலைகள் மற்றும் NLRP3 மற்றும் ASC இன் இம்யூனோஃப்ளோரசன்ட் உள்ளூர்மயமாக்கல்.G. டூடெனலிஸின் நோய்க்கிருமித்தன்மையில் NLRP3 அழற்சியின் பங்கு பின்னர் எலிகளைப் பயன்படுத்தி மதிப்பிடப்பட்டது, இதில் NLRP3 செயல்படுத்தல் தடுக்கப்பட்டது (NLRP3 தடுக்கப்பட்ட எலிகள்) மற்றும் உடல் எடை, டூடெனனல் ஒட்டுண்ணி சுமை மற்றும் டூடெனனல் திசு ஆகியவற்றில் நோயியல் மாற்றங்கள் கண்காணிக்கப்பட்டன.கூடுதலாக, ஹியர்டைன்கள் ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஆகியவை விவோவில் IL-1β சுரப்பை NLRP3 அழற்சி மூலம் தூண்டுகின்றனவா என்பதை ஆராய்ந்தோம், மேலும் எலிகளில் ஜி. டியோடெனலிஸின் நோய்க்கிருமித்தன்மையில் இந்த மூலக்கூறுகளின் பங்கை தீர்மானித்தோம்.
ஆல்ஃபா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன்கள் என்எல்ஆர்பி3 இன் விட்ரோவின் அழற்சியை செயல்படுத்த தூண்டுகிறது.இது p20 காஸ்பேஸ்-1 செயல்படுத்தப்படுவதற்கு வழிவகுத்தது, NLRP3, சார்பு IL-1β மற்றும் ப்ரோ-காஸ்பேஸ்-1 புரதங்களின் வெளிப்பாடு அளவுகளில் அதிகரிப்பு, IL-1β சுரப்பில் குறிப்பிடத்தக்க அதிகரிப்பு, ASA புள்ளிகள் உருவாக்கம் சைட்டோபிளாசம், மற்றும் ஏஎஸ்ஏ ஒலிகோமரைசேஷன் தூண்டுதல்.NLRP3 அழற்சி ஆண்குறி இழப்பு எலிகளில் G. டூடெனலிஸின் நோய்க்கிருமித்தன்மையை அதிகரிக்கிறது.NLRP3-தடுக்கப்பட்ட எலிகள் மூலம் நீர்க்கட்டிகள் மூலம் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட எலிகள் அதிக எண்ணிக்கையிலான ட்ரோபோசோயிட்களை வெளிப்படுத்தியது மற்றும் டூடெனனல் வில்லிக்கு கடுமையான சேதத்தை வெளிப்படுத்தியது.விவோ சோதனைகளில் ஜியார்டின்கள் ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஆகியவை என்எல்ஆர்பி3 இன்ஃப்ளமஸம் வழியாக IL-1β சுரப்பைத் தூண்டலாம், மேலும் ஜியார்டைன்ஸ் ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஆகியவற்றுடன் தடுப்பூசி போடுவது எலிகளில் ஜி. டூடெனலிஸின் நோய்க்கிருமித்தன்மையைக் குறைத்தது.
ஒன்றாக எடுத்துக்கொண்டால், ஜியார்டியா ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஹோஸ்ட் என்எல்ஆர்பி3 வீக்கத்தை அதிகப்படுத்துகிறது மற்றும் ஜியார்டியாசிஸைத் தடுப்பதற்கான இலக்குகளாக இருக்கும் எலிகளில் ஜி. டியோடெனலிஸின் தொற்றுநோயைக் குறைக்கிறது என்று இந்த ஆய்வின் முடிவுகள் தெரிவிக்கின்றன.
ஜியார்டியா டியோடெனம் என்பது ஒரு புற-செல்லுலார் புரோட்டோசோவான் ஒட்டுண்ணியாகும், இது சிறுகுடலில் வாழ்கிறது மற்றும் ஆண்டுதோறும் வயிற்றுப்போக்குடன் 280 மில்லியன் ஜியார்டியாசிஸை ஏற்படுத்துகிறது, குறிப்பாக வளரும் நாடுகளில் உள்ள சிறு குழந்தைகளிடையே [1].M. டியோடினம் நீர்க்கட்டிகளால் அசுத்தமான குடிநீர் அல்லது உணவு மூலம் மக்கள் தொற்றுக்கு ஆளாகின்றனர், பின்னர் அவை வயிற்றில் நுழைந்து இரைப்பை சாறுகளில் வெளியேற்றப்படுகின்றன.ஜியார்டியா டியோடெனம் ட்ரோபோசோயிட்கள் டூடெனனல் எபிட்டிலியத்துடன் இணைகின்றன, இதனால் குமட்டல், வாந்தி, வயிற்றுப்போக்கு, வயிற்று வலி மற்றும் எடை இழப்பு ஏற்படுகிறது.நோயெதிர்ப்பு குறைபாடு மற்றும் சிஸ்டிக் ஃபைப்ரோஸிஸ் கொண்ட நபர்கள் தொற்றுநோய்க்கு ஆளாகிறார்கள்.வாய்வழி மற்றும் குத செக்ஸ் மூலமாகவும் தொற்று ஏற்படலாம் [2].மெட்ரோனிடசோல், டினிடாசோல் மற்றும் நிட்டாசோக்சனைடு போன்ற மருந்துகள் டூடெனனல் நோய்த்தொற்றுகளுக்கு விருப்பமான சிகிச்சை விருப்பங்கள் [3].இருப்பினும், இந்த கீமோதெரபி மருந்துகள் குமட்டல், புற்றுநோய் மற்றும் மரபணு நச்சுத்தன்மை [4] போன்ற பாதகமான பக்க விளைவுகளை ஏற்படுத்துகின்றன.எனவே, ஜி. டூடெனலிஸ் நோய்த்தொற்றைத் தடுக்க மிகவும் பயனுள்ள உத்திகள் உருவாக்கப்பட வேண்டும்.
அழற்சிகள் என்பது சைட்டோசோலிக் புரத வளாகங்களின் ஒரு வகுப்பாகும், அவை உள்ளார்ந்த நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியின் ஒரு பகுதியாகும், இது நோய்க்கிருமி படையெடுப்பிற்கு எதிராக பாதுகாக்க உதவுகிறது மற்றும் அழற்சி பதில்களை மத்தியஸ்தம் செய்கிறது [5].இந்த அழற்சிகளில், நியூக்ளியோடைடு-பிணைப்பு ஒலிகோமரைசேஷன் (NOD) ஏற்பி 3 (NLRP3) நியூக்ளியோடைடு-பிணைப்பு ஒலிகோமரைசேஷன் (NLRP3) நியூக்ளியோடைடு-பிணைப்பு போன்ற அழற்சியானது விரிவாக ஆய்வு செய்யப்பட்டுள்ளது, ஏனெனில் இது பல்வேறு நோய்க்கிருமிகள்/சேதங்கள்/தொடர்புடைய மூலக்கூறுகளால் கண்டறியப்படலாம். DAMP), உள்ளார்ந்த நோயெதிர்ப்பு மண்டலத்தை அங்கீகரிக்கிறது, செயல்படுத்துகிறது.மற்றும் பல அழற்சி நோய்களில் [6,7,8] குடல் ஹோமியோஸ்டாசிஸை ஒழுங்குபடுத்துகிறது.இது பேட்டர்ன் ரெகக்னிஷன் ரிசெப்டர் (PRR) NLRP3, ஒரு அடாப்டர் அப்போப்டொடிக் ஸ்பாட் புரோட்டீன் (ASC) மற்றும் ஒரு எஃபெக்டர் ப்ரோகாஸ்பேஸ்-1 அல்லது ப்ரோகாஸ்பேஸ்-11 ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளது.நியோஸ்போரா கேனினம் [9], பாராகோசிடியோடைஸ் பிரேசிலியென்சிஸ் [10] மற்றும் லீஷ்மேனியா ஆய்வுகளில் காணப்பட்டபடி, நோய்க்கிருமி படையெடுப்பிற்கு எதிராக NLRP3 அழற்சியானது ஒரு புரவலனாக செயல்படுகிறது.[11], ஆனால் NLRP3 அழற்சியை செயல்படுத்துவது பாதுகாப்பு நோயெதிர்ப்பு மறுமொழிகளைக் கட்டுப்படுத்துகிறது மற்றும் நோய் முன்னேற்றத்தை அதிகரிக்கிறது, எடுத்துக்காட்டாக, புழுக்களில் [12].எங்கள் முந்தைய கண்டுபிடிப்புகளின் அடிப்படையில், எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் ஜி. டியோடெனலிஸ் என்எல்ஆர்பி3 அழற்சியின் உள்செல்லுலார் செயல்படுத்தலைத் தூண்டுகிறது மற்றும் எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் வெசிகல்ஸ் (ஈவிகள்) [13] சுரப்பதன் மூலம் ஹோஸ்ட் அழற்சி பதில்களை மாற்றியமைக்கிறது என்று நாங்கள் தெரிவித்தோம்.இருப்பினும், விவோவில் உள்ள ஜி. டியோடெனலிஸ் நோய்த்தொற்றில் NLRP3 அழற்சியின் பங்கு தீர்மானிக்கப்பட உள்ளது.
ஜியார்டின்கள் முதலில் G. டியோடெனலிஸ் சைட்டோஸ்கெலட்டனின் கட்டமைப்பு கூறுகளாக விவரிக்கப்பட்டது மற்றும் சிறுகுடலில் ட்ரோபோசோயிட் இயக்கம் மற்றும் எபிடெலியல் செல் இணைப்பில் முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது.சுற்றுச்சூழலுக்கு சிறப்பாக மாற்றியமைக்கவும், அவற்றின் நோய்க்கிருமித்தன்மையை அதிகரிக்கவும், ஜி. டியோடெனலிஸ் ட்ரோபோசோயிட்டுகள் 8 ஃபிளாஜெல்லா, 1 நடுத்தர உடல் மற்றும் 1 வென்ட்ரல் டிஸ்க் [14] ஆகியவற்றைக் கொண்ட ஒரு தனித்துவமான சைட்டோஸ்கெலிட்டல் அமைப்பை உருவாக்கியது.ஜியார்டியா டியோடெனத்தின் ட்ரோபோசோயிட்டுகள் அவற்றின் சைட்டோஸ்கெலட்டனைப் பயன்படுத்தி மேல் சிறுகுடலில், குறிப்பாக சிறுகுடலில் ஊடுருவி, என்டோரோசைட்டுகளுடன் இணைக்கின்றன.அவை தொடர்ந்து இடம்பெயர்ந்து செல் வளர்சிதை மாற்றத்தைப் பயன்படுத்தி எபிடெலியல் செல்களுடன் இணைகின்றன.எனவே, அவற்றின் சைட்டோஸ்கெலட்டனுக்கும் வைரல்ஸுக்கும் இடையே நெருங்கிய தொடர்பு உள்ளது.ஜியார்டியா டியோடெனத்திற்கு குறிப்பிட்ட ஜியார்டைன்கள் சைட்டோஸ்கெலட்டன் கட்டமைப்பின் கூறுகள் [15] மற்றும் நான்கு வகைகளாகப் பிரிக்கப்படுகின்றன: α-, β-, γ- மற்றும் δ-ஜியார்டின்கள்.α-ஜியார்டின் குடும்பத்தில் 21 உறுப்பினர்கள் உள்ளனர், இவை அனைத்தும் பாஸ்போலிப்பிட்களை பிணைக்கும் கால்சியம் சார்ந்த திறனைக் கொண்டுள்ளன [16].அவை சைட்டோஸ்கெலட்டனை செல் சவ்வுடன் இணைக்கின்றன.ஜி. டியோடெனலிஸால் ஏற்படும் வயிற்றுப்போக்கு உள்ள நபர்களில், α-ஜியார்டின்கள் நோய்த்தொற்றின் போது அதிக அளவில் வெளிப்படுத்தப்பட்டு, நோய் எதிர்ப்பு சக்தி கொண்டவை [17].ஜியார்டியா ஆல்ஃபா-1 ஐ அடிப்படையாகக் கொண்ட ஹெட்டோரோலஜஸ் தடுப்பூசிகள் எலிகளில் ஜியார்டியாசிஸிலிருந்து பாதுகாக்கப்படுகின்றன மற்றும் தடுப்பூசி உருவாக்கத்திற்கான சாத்தியமான வேட்பாளர் ஆன்டிஜென்களாகும் [18].ஆல்பா-8 ஜியார்டின், பிளாஸ்மா சவ்வு மற்றும் ஃபிளாஜெல்லாவில் உள்ளமைக்கப்பட்டுள்ளது, ஆனால் வென்ட்ரல் டிஸ்கில் இல்லை, ஜி. டியோடெனலிஸில் உள்ள ட்ரோபோசோயிட்களின் இயக்கம் மற்றும் வளர்ச்சி விகிதத்தை அதிகரிக்கிறது [19].ஆல்பா-14 ஜியார்டின் ஃபிளாஜெல்லாவில் உள்ள நுண்குழாய் கட்டமைப்புகளுடன் இணைகிறது மற்றும் ஜி. டியோடெனலிஸின் நம்பகத்தன்மையை பாதிக்கிறது [20].ஆல்ஃபா-11 ஜியார்டின் வாழ்க்கைச் சுழற்சி முழுவதும் ஏராளமாக உள்ளது, மேலும் ஆல்பா-11 ஜியார்டைனின் அதிகப்படியான வெளிப்பாடு ஜி. டியோடெனலிஸையே சேதப்படுத்துகிறது [21].இருப்பினும், ஆல்பா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன் ஆகியவை ஜி. டியோடெனலிஸ் தொற்று மற்றும் அவற்றின் அடிப்படை வழிமுறைகளுக்கு எதிராக பாதுகாப்பா என்பது தெளிவாக இல்லை.
இந்த ஆய்வில், மறுசீரமைப்பு யூகாரியோடிக் வெளிப்பாடு பிளாஸ்மிட்கள் pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine மற்றும் pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ஆகியவை ஹோஸ்ட் NLRP3ஐச் செயல்படுத்த மவுஸ் முதன்மை பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களாக மாற்றப்பட்டன.அழற்சி இலக்குகள் பின்னர் திரையிடப்பட்டன.ஜி. டியோடெனலிஸின் நோய்க்கிருமித்தன்மையில் NLRP3 இன்ஃப்ளேமஸமின் பங்கையும் மதிப்பிட்டோம், ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7,3 ஜியார்டின்கள் விவோவில் உள்ள NLRP3 அழற்சியின் செயல்பாட்டைத் தூண்டுகிறதா என்பதை ஆராய்ந்தோம், மேலும் இந்த இரண்டு பாத்திரங்களும் ஜியார்டைன்களின் நோய்க்கிருமித் தன்மையில் இருப்பதைத் தீர்மானித்தோம். ஜி. டியோடெனலிஸ்.ஜி. டூடெனலிஸ் நோய்த்தொற்றைத் தடுப்பதற்கான நம்பிக்கைக்குரிய இலக்குகளை உருவாக்குவதே எங்கள் பொதுவான குறிக்கோளாக இருந்தது.
5-8 வார வயதுடைய காட்டு வகை (WT) C57BL/6 பெண் எலிகள் Liaoning Changsheng பரிசோதனை விலங்கு மையத்திலிருந்து (Liaoning, China) வாங்கப்பட்டன.எலிகளுக்கு தண்ணீர் இலவச அணுகல் இருந்தது, கிருமி நீக்கம் செய்யப்பட்ட உணவு கிடைத்தது மற்றும் 12/12 மணிநேர ஒளி/இருண்ட சுழற்சியில் வைக்கப்பட்டன.நோய்த்தொற்றுக்கு முன், எலிகள் அம்பிசிலின் (1 mg/mL), வான்கோமைசின் (1 mg/mL), மற்றும் neomycin (1.4 mg/mL) (அனைத்தும் ஷாங்காய், சீனா, செயற்கை உயிரினங்களிலிருந்து வாங்கப்பட்டவை) [22] ஆகியவற்றுடன் கூடிய குடிநீரில் ஆண்டிபயாடிக் மருந்துகளைப் பெற்றன. ].].24 மணி நேரத்திற்கும் மேலாக உண்ணும் மற்றும் குடிக்கும் திறனை இழந்து ≥ 20% உடல் எடையை இழந்த எலிகள் கர்ப்பப்பை வாய் இடப்பெயர்ச்சியால் மனிதாபிமானத்துடன் கருணைக்கொலை செய்யப்பட்டன.
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, USA) 12.5% ​​கரு போவின் சீரம் (FBS; எவ்ரி கிரீன், ஜெஜியாங், சீனா) மற்றும் 0.1% போவின் பித்தம் (சிக்மா-ஆல்ட்ரிச், அமெரிக்கா) ஆகியவற்றுடன் கூடுதலாக சேர்க்கப்பட்டது. )அமெரிக்கா) மைக்ரோ ஏரோபிக் நிலைமைகளின் கீழ்.சங்கமமான ட்ரோபோசோயிட்டுகள் பனியில் சேகரிக்கப்பட்டு மேலும் இனப்பெருக்கம் செய்வதற்காக 1:4 என்ற விகிதத்தில் அனுப்பப்பட்டன.
ஜியார்டியா டியோடெனம் நீர்க்கட்டிகள் முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி தூண்டப்பட்டன [23], ட்ரோபோசோயிட்டுகள் மடக்கைக் கட்டத்தில் அறுவடை செய்யப்பட்டு, பின்னர் 1 × 106 ட்ரோபோசோயிட்கள்/mL என்ற இறுதி செறிவுக்கு pH 7.1 (மாற்றியமைக்கப்பட்ட TYI-S-33) உள்ளடக்கிய ஊடகத்துடன் நீர்த்தப்பட்டன.பித்த செறிவு 0.05% நடுத்தர).ட்ரோபோசோயிட்டுகள் காற்றில்லா நிலைகளின் கீழ் 37°C இல் மடக்கை வளர்ச்சி கட்டம் வரை வளர்க்கப்பட்டன.ஊடகத்தை நீர்க்கட்டி தூண்டும் ஊடகமாக மாற்றவும் (pH 7.8; 1% பித்த செறிவுடன் மாற்றியமைக்கப்பட்ட TYI-S-33 ஊடகம்) மற்றும் கலாச்சாரம் G. duodenalis 37 ° C க்கு 48-96 மணி நேரம், இதன் போது உருவாக்கம் நீர்க்கட்டிகள் நுண்ணோக்கின் கீழ் காணப்பட்டன.பெரும்பாலான ட்ரோபோசோயிட்டுகள் நீர்க்கட்டிகளை உருவாக்க தூண்டப்பட்ட பிறகு, கலாச்சார கலவை அறுவடை செய்யப்பட்டு, மீதமுள்ள ட்ரோபோசோயிட்டுகளை லைஸ் செய்ய மலட்டு டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட நீரில் மீண்டும் இணைக்கப்பட்டது.எலிகளில் உள்ள இரைப்பைக் குழாய் மூலம் அடுத்தடுத்த பகுப்பாய்வுகளுக்காக நீர்க்கட்டிகள் 4 ° C இல் கணக்கிடப்பட்டு சேமிக்கப்பட்டன.
ஜியார்டியா எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் வெசிகல்ஸ் (ஜிஇவி) முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி செறிவூட்டப்பட்டது [13].மடக்கை வளர்ச்சி கட்டத்தில் உள்ள ட்ரோபோசோயிட்டுகள் மாற்றியமைக்கப்பட்ட TYI-S-33 ஊடகத்தில் எக்ஸோசோம்-குறைக்கப்பட்ட FBS (பயாலாஜிக்கல் இண்டஸ்ட்ரீஸ், பீட்-ஹேமெக், இஸ்ரேல்) மூலம் 1 × 106 ஒட்டுண்ணிகள்/mL என்ற இறுதி செறிவுக்குத் தயாரிக்கப்பட்டு 12 மணி நேரம் அடைகாக்கப்பட்டது.10 நிமிடத்திற்கு 2000 கிராம், 45 நிமிடங்களுக்கு 10,000 கிராம் மற்றும் 60 நிமிடங்களுக்கு 100,000 கிராம் என்ற அளவில் மையவிலக்கு மூலம் கலாச்சார சூப்பர்நேட்டண்டிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்டது.பிசிஏ புரோட்டீன் அஸ்ஸே கிட் (தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிஃபிக், வால்தம், எம்ஏ, யுஎஸ்ஏ) பயன்படுத்தி அளவிடப்பட்ட பாஸ்பேட் பஃபர்டு சேலைனில் (பிபிஎஸ்) வீழ்படிவுகள் கரைக்கப்பட்டு -80° C. இல் சேமிக்கப்பட்டன அல்லது கூடுதல் பகுப்பாய்வுகளுக்கு நேரடியாகப் பயன்படுத்தப்பட்டன.
முதன்மை சுட்டி பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்கள் முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி தயாரிக்கப்பட்டன [24].சுருக்கமாக, எலிகளுக்கு (6-8 வார வயதுடையவர்கள்) 2.5 மில்லி 2.98% டிஃப்கோ திரவ தியோகிளைகோல் மீடியம் (BD, ஃபிராங்க்ளின் லேக்ஸ், NJ, USA) மூலம் செலுத்தப்பட்டு (intraperitoneally [ip]) மற்றும் 3-4 அண்ணங்களுக்கு உணவளிக்கப்பட்டது.கருணைக்கொலைக்குப் பிறகு எலிகளின் வயிற்றுத் துவாரத்திலிருந்து மேக்ரோபேஜ்களின் இடைநீக்கம் சேகரிக்கப்பட்டு 10 நிமிடங்களுக்கு 1000 கிராம் என்ற அளவில் 3 முறை மையவிலக்கு செய்யப்பட்டது.செல் தூய்மை>98% வரை CD11b மார்க்கரைப் பயன்படுத்தி ஃப்ளோ சைட்டோமெட்ரி மூலம் அறுவடை செய்யப்பட்ட செல்கள் கண்டறியப்பட்டன, பின்னர் 6-கிணறு செல் வளர்ப்புத் தகடுகளில் (4.5 x 106 செல்கள்/கிணறு) சேர்க்கப்பட்டு 37°C வெப்பநிலையில் 10% FBS (Bioindustry) உடன் அடைகாக்கப்பட்டது.மற்றும் 5% CO2.
1 மில்லி டிரிசோல் ரீஜெண்டில் (வாசைம், நான்ஜிங், சீனா) 1 × 107 ட்ரோபோசோயிட்டுகளிலிருந்து ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கப்பட்டது, மான்ஸ்கிரிப்ட் டிஎஸ்டிநேஸ் (மொனாட், வுஹான், சீனா) ஐப் பயன்படுத்தி மொத்த ஜி. டியோடெனலிஸ் ஆர்என்ஏவில் இருந்து மரபணு டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கப்பட்டது மற்றும் நிரப்பு டிஎன்ஏ (சிடிஎன்ஏ) ஆனது. உற்பத்தியாளரின் அறிவுறுத்தல்களின்படி MonScript RTIIII சூப்பர் மிக்ஸ் (மோனாட்) ஐப் பயன்படுத்துகிறது.
இலக்கு ஜி. டியோடெனலிஸ் மரபணுவுக்கான சிடிஎஸ் வரிசை தகவல் NCBI ஜென்பேங்கிலிருந்து பெறப்பட்டது.ஒவ்வொரு இலக்கு மரபணுவிற்கும் குறிப்பிட்ட தடையற்ற குளோனிங் ப்ரைமர்களை வடிவமைக்க ப்ரைமர் 5.0 ஐப் பயன்படுத்தவும்.முன்னோக்கி ப்ரைமர் (5′-3′) மூன்று பகுதிகளைக் கொண்டுள்ளது: ஒரு நேர்கோட்டு திசையன் pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) மற்றும் தொடக்கக் கோடான்கள் ATG மற்றும் GNN (முதல் அடிப்படை G இல்லை என்றால்) உடன் மேலெழுதும் வரிசை.வெளிப்பாட்டின் செயல்திறனை மேம்படுத்த இது செய்யப்படுகிறது.கூடுதலாக, குறைந்தபட்சம் 16 பிபி இணைந்த அடிப்படைகள் (ஜிசி உள்ளடக்கம் 40-60%/டிஎம் தோராயமாக. 55 டிகிரி செல்சியஸ்).தலைகீழ் ப்ரைமர் (5′-3′) இரண்டு பகுதிகளைக் கொண்டுள்ளது, ஒரு EcoRV-நேரியல் திசையன் pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) மற்றும் குறைந்தபட்சம் 16 bp இன் ஒருங்கிணைந்த அடித்தளத்துடன் கூடிய ஒன்றுடன் ஒன்று வரிசை.(கடைசி இரண்டு நிறுத்தங்களைத் தவிர்த்து).அடிப்படைகள்) AA அல்லது GA போன்ற ஒரு கோடான் மறுசீரமைப்பு பிளாஸ்மிட்கள் அவற்றின் பெயரிடப்பட்ட புரதங்களை வெளிப்படுத்த அனுமதிக்கிறது).ப்ரைமர் வரிசைகள் அட்டவணை 1 இல் பட்டியலிடப்பட்டுள்ளன மற்றும் காங்மெட் பயோடெக்னாலஜி கோ., லிமிடெட் (சாங்சுன், சீனா) மூலம் ஒருங்கிணைக்கப்பட்டது.
Pfu DNA பாலிமரேஸ் (Tiangen, Beijing, China) அல்லது Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி இலக்குகள் பெருக்கப்பட்டனயூகாரியோடிக் வெளிப்பாடு வெக்டார் பிளாஸ்மிட் pcDNA3.1(+) கட்டுப்பாடு என்சைம் EcoRV உடன் நேர்கோட்டானது மற்றும் ஃபாஸ்ட் AP (தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) ஐப் பயன்படுத்தி டிஃபோஸ்ஃபோரிலேட்டட் செய்யப்பட்டது.நேரியப்படுத்தப்பட்ட pcDNA3.1(+) துண்டுகள் மற்றும் பெருக்கப்பட்ட இலக்கு மரபணு துண்டுகள் DNA ஜெல் சுத்திகரிப்பு கிட் (Tiangen) ஐப் பயன்படுத்தி சுத்திகரிக்கப்பட்டது மற்றும் Nanodrop ND-2000 (தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) ஐப் பயன்படுத்தி அளவிடப்பட்டது.pcDNA3.1(+) துண்டு மற்றும் ஒவ்வொரு இலக்கு மரபணு துண்டும் MonClone சிங்கிள் அசெம்பிளி குளோனிங் கலவையை (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, China) பயன்படுத்தி மீண்டும் ஒருங்கிணைக்கப்பட்டது மற்றும் Comate Bioscience Company Limited (Changchun, China) ஐப் பயன்படுத்தி DNA வரிசைமுறை மூலம் உறுதிப்படுத்தப்பட்டது..
எண்டோடாக்சின் இல்லாத பிளாஸ்மிடுகள் pcDNA3.1(+)-alpha-2 மற்றும் pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ஆகியவை SanPrep எண்டோடாக்சின் இல்லாத பிளாஸ்மிட் மினி கிட் (Sangon Biotech) ஐப் பயன்படுத்தி உருவாக்கப்பட்டன.எலுஷன் பஃபரில் உள்ள ஈடிடிஏ இடமாற்ற மதிப்பீட்டில் தலையிடாமல் இருப்பதை உறுதிசெய்ய, செறிவு 500 ng/µl க்கு மேல் பராமரிக்கப்பட்டது.முதன்மை சுட்டி பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்கள் 12 மணி நேரம் முழுமையான RPMI 1640 நடுத்தர (உயிரியல் தொழில்கள்) கொண்ட 6-கிணறு தகடுகளில் வளர்க்கப்பட்டன, பின்னர் செல்கள் பென்சிலின் மற்றும் ஸ்ட்ரெப்டோமைசினை அகற்ற சூடான பிபிஎஸ்ஸில் 3 முறை கழுவப்பட்டன, பின்னர் நடுத்தரத்தில் முழுமையான நடுத்தரத்துடன் நிரப்பப்பட்டன.எண்டோடாக்சின் இல்லாத பிளாஸ்மிடுகள் pcDNA3.1(+)-alpha-2 மற்றும் pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) ஆகியவை 125 μl Opti-MEM குறைக்கப்பட்ட சீரம் மீடியத்தில் (கிப்கோ, தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) நீர்த்தப்பட்டன..பின்னர் 5 µl லிபோஃபெக்டமைன் 2000 டிரான்ஸ்ஃபெக்ஷன் ரியாஜென்ட் (இன்விட்ரஜன், தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) 125 µl குறைந்த சீரம் ஆப்டி-எம்இஎம் மீடியத்தில் நீர்த்தப்பட்டது.லிபோஃபெக்டமைன் 2000 உடன் நீர்த்த எண்டோடாக்சின் இல்லாத பிளாஸ்மிட்டைக் கலந்து, கலவையை அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்கள் நிற்க அனுமதிப்பதன் மூலம் லிபோசோம்-டிஎன்ஏ வளாகங்களைத் தயாரிக்கவும்.ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் உள்ள கலங்களுக்கு தனித்தனியாக வளாகங்களை மாற்றி மெதுவாக கலக்கவும்.4 மணிநேரத்திற்குப் பிறகு, செல் வளர்ப்பு ஊடகம் 2 மில்லி முழுமையான RPMI 1640 ஊடகத்துடன் மாற்றப்பட்டது மற்றும் கலாச்சாரம் 24 மணி நேரம் தொடர்ந்தது.புதிய செல் வளர்ப்பு ஊடகம் கலங்களில் சேர்க்கப்பட்டது மற்றும் மதிப்பீட்டு வடிவமைப்பைப் பொறுத்து பல்வேறு நேர புள்ளிகளுக்கு அடைகாக்கப்பட்டது.
சூப்பர்நேட்டண்டுகள் மற்றும் செல் லைசேட்டுகளிலிருந்து புரத மாதிரிகள் முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி தயாரிக்கப்பட்டன [25].சார்பு-IL-1β, ப்ரோ-காஸ்பேஸ்-1, காஸ்பேஸ்-1 p20, NLRP3, β-ஆக்டின் மற்றும் ஹிஸ்-டேக் ஆகியவற்றிற்கான சவ்வு பரிமாற்ற அளவுருக்கள் 200 mA/90 நிமிடம்.இன்டர்லூகின் 1β (IL-1β; R&D சிஸ்டம்ஸ், மினியாபோலிஸ், மினசோட்டா, அமெரிக்கா), காஸ்பேஸ்-1 (p20) (அடிபோஜென், சுவிட்சர்லாந்து) மற்றும் NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Switzerland) மற்றும் 1:5000, அவருடைய Scient ஐ இலக்காகக் கொண்டது வுஹான், சீனா) மற்றும் β-ஆக்டின் (புரோட்டீன்டெக், வுஹான், சீனா).
முன்பு விவரிக்கப்பட்டபடி டிசுசினிமைடு சப்ரேட்டுடன் (டிஎஸ்எஸ்) குறுக்கு இணைப்பு செய்யப்பட்டது [26].25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES மற்றும் 125 mM NaHCO3 ஆகியவற்றைக் கொண்ட 50 µl ASC எதிர்வினை இடையகத்தில் (pH 8.0) செல்கள் 3 முறை குளிர்ந்த பிபிஎஸ் மூலம் 27 கேஜ் ஊசியால் லைஸ் செய்யப்பட்டன.கலவை 3 நிமிடத்திற்கு 5000 கிராம் மையவிலக்கு செய்யப்பட்டது மற்றும் துகள் 10 µl DSS (DMSO இல் 25 mM) மற்றும் 37 ° C வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்களுக்கு 40 µl ASC எதிர்வினை இடையகத்துடன் தைக்கப்பட்டது.10 நிமிடங்களுக்கு 5000 கிராம் மையவிலக்கு செய்த பிறகு, 40 µl ASC எதிர்வினை தாங்கல் மற்றும் 10 µl 6x புரத ஏற்றுதல் தாங்கல் (டிரான்ஸ்ஜென், பெய்ஜிங், சீனா) கரைசலில் கரைக்கப்பட்டது, பின்னர் தீர்வு அறை வெப்பநிலையில் 15 க்கு அணைக்கப்பட்டது. நிமிடம், பின்னர் 10 நிமிடங்கள் கொதிக்கவும்.புரோட்டீன் மாதிரிகள் 1:500 என்ற நீர்த்த விகிதத்தில் முதன்மை ASC எதிர்ப்பு ஆன்டிபாடிகளை (வான்லிபியோ, ஷென்யாங், சீனா) பயன்படுத்தி மேற்கத்திய பிளாட்டிங்கிற்கு உட்படுத்தப்பட்டன.
முன்னர் விவரிக்கப்பட்ட செயல்முறையைப் பின்பற்றி [13], செல் வளர்ப்பு சூப்பர்நேட்டண்டுகள் அறுவடை செய்யப்பட்டன மற்றும் அழற்சிக்கு சார்பான சைட்டோகைன் IL-1β இன் சுரப்பு மவுஸ் IL-1 பீட்டா ELISA கிட் (இன்விட்ரஜன், தெர்மோ ஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) ஐப் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்பட்டது.IL-1β நிலையான வளைவைப் பயன்படுத்தி OD450nm மதிப்புகளை புரதச் செறிவுகளாக மாற்றவும்.
கவர்ஸ்லிப்களில் பூசப்பட்ட செல்கள் மெதுவாக சூடான பிபிஎஸ்ஸில் 3 முறை கழுவப்பட்டு, அறை வெப்பநிலையில் (ஆர்டி) 10 நிமிடங்களுக்கு திசு செல் ஃபிக்ஸேடிவ் (பயோஷார்ப், பெய்ஜிங், சீனா) இல் சரி செய்யப்பட்டது, 0.1% ட்ரைடன் எக்ஸ்-பெர்மீபிலைஸ் 100 இல் (பிபிஎஸ்; பயோசார்ப்பில் நீர்த்தப்பட்டது. ) அறை வெப்பநிலையில் 20 நிமிடங்கள் மற்றும் 5% போவின் சீரம் அல்புமினில் (PBS இல்) அறை வெப்பநிலையில் 2 மணிநேரம் தடுக்கவும்.செல்கள் முறையே ASC (1:100 நீர்த்தல்) அல்லது NLRP3 (1:100 நீர்த்தல்) ஆகியவற்றுக்கு எதிரான முதன்மை ஆன்டிபாடிகளுடன் 4°C வெப்பநிலையில் ஒரே இரவில் அடைகாத்தன, மேலும் Cy3 ஆடு முயல் எதிர்ப்பு IgG(H+L) (1:400; EarthOx) என்று பெயரிடப்பட்டது. , San Francisco, CA, USA) அல்லது FITC-இணைந்த ஆடு மவுஸ் எதிர்ப்பு IgG (1:400; Earthox) ஒரே இரவில் இருட்டில் 37°C வெப்பநிலையில் 1 மணிநேரம்.கருக்கள் 5 நிமிடங்களுக்கு Hoechst 33258 (10 μg/ml; UE, Suzhou, சீனா) மூலம் கறைபட்டது மற்றும் ஒரு ஒளிரும் நுண்ணோக்கியின் கீழ் (ஒலிம்பஸ் கார்ப்பரேஷன், டோக்கியோ, ஜப்பான்) கவனிக்கப்பட்டது.
எலிகள் நான்கு குழுக்களாகப் பிரிக்கப்பட்டன (ஒவ்வொரு குழுவிலும் n = 7): (i) பிபிஎஸ்-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட எதிர்மறைக் கட்டுப்பாட்டுக் குழு (பிபிஎஸ் மட்டும்; கேவேஜ் 100 µl/மவுஸ் பிபிஎஸ் பின்னர் தினசரி இன்ட்ராபெரிட்டோனியல் ஊசி 100 µl/மவுஸ் பிபிஎஸ் 3 மணி நேரம் கழித்து) ., தொடர்ந்து 7 நாட்கள்);(ii) MCC950 தடுப்பானுடன் [27] (PBS கேவேஜ் வழியாக 100 µl/மவுஸ், 3 மணி நேரம் கழித்து, 10 mg/kg உடல் எடையில் [BW] MCC950 [PBS இல்] சிகிச்சை அளிக்கப்படும் எதிர்மறைக் கட்டுப்பாட்டுக் குழு தினசரி, 7 நாட்கள் கால அளவு);(iii) ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி நோய்த்தொற்று குழு (1.5 x 106 நீர்க்கட்டிகள்/மவுஸ் பை கேவேஜ், 3 மணி நேரம் கழித்து, 100 μl/மவுஸ் பிபிஎஸ் இன்ட்ராபெரிடோனியாக தினமும் 7 நாட்களுக்கு நிர்வகிக்கப்படுகிறது);(iv) ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி ஒருங்கிணைந்த தொற்றுக் குழு MCC950 தடுப்பான் சிகிச்சைக் குழு (1.5×106 நீர்க்கட்டிகள்/மவுஸ் வழியாக, 10mg/kg உடல் எடையில் MCC950 இன்ட்ராபெரிட்டோனியாக தினமும் 3h மணிக்கு 7 நாட்கள்).ஒவ்வொரு எலியின் உடல் எடையும் தினமும் கண்காணிக்கப்பட்டு 7வது நாளில் அனைத்து எலிகளும் கருணைக்கொலை செய்யப்பட்டன.அறுவடை செய்யப்பட்ட டியோடினம் (3 செ.மீ. நீளம்) 1 மில்லி பிபிஎஸ்ஸில் சிறிய துண்டுகளாக வெட்டப்பட்டது, பிபிஎஸ்ஸில் 4 டிகிரி செல்சியஸ் மற்றும் ஜி. டியோடெனலிஸ் ட்ரோபோசோயிட்ஸ் ஒரே இரவில் நீர்க்கட்டிகள் அழிக்கப்பட்டன.ஹெமாடாக்சிலின் மற்றும் ஈசின் (எச்&இ) கறை படிவதற்கு புதிய டியோடினம் (1 செமீ நீளம்) தனிமைப்படுத்தப்பட்டது.
எலிகள் இரண்டு குழுக்களாகப் பிரிக்கப்பட்டன: (i) MOCK கட்டுப்பாட்டு குழு மற்றும் (ii) MCC950 இன்ஹிபிட்டர் குழு.ஒவ்வொரு குழுவிலும் ஐந்து சிகிச்சைகள் இருந்தன (n = 7/சிகிச்சை குழு): (i) பிபிஎஸ் சிகிச்சை எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழு (பிபிஎஸ் மட்டும்; 100 µl/மவுஸ் பிபிஎஸ், இன்ட்ராமுஸ்குலர் (ஐஎம்) ஊசி (டிபியாலிஸ் முன்புறம்) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) பிளாஸ்மிட் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழு (100 µg/மவுஸ் டிஎன்ஏ, இன்ட்ராமுஸ்குலர் ஊசி மூலம்) பிளாஸ்மிட் pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/மவுஸ் டிஎன்ஏ, இன்ட்ராமுஸ்குலர் ஊசி மூலம்) மற்றும் (v) பிளாஸ்மிட் pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 µg/mouse) மூலம் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட குழு டிஎன்ஏ, 12 மணிநேரம் கடந்து சென்ற பிறகு, MCC950 இன்ஹிபிட்டர் குழுவில் உள்ள எலிகள் 7 நாட்களுக்கு MCC950 (10 mg/kg உடல் எடை) இன்ட்ராபெரிட்டோனியல் ஊசியை 7 நாட்களுக்குப் பெற்றன, அதே நேரத்தில் MOCK குழுவில் உள்ள எலிகள் சம அளவு PBS சிகிச்சையைப் பெற்றன. இரத்த மாதிரிகள் IL-1β அளவீடுகளுக்கான நொதி-இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பண்ட் மதிப்பீட்டைப் (ELISA) பயன்படுத்தி ஒரே இரவில் 4 °C இல் சீரம் மாதிரிகள் எலிகளிலிருந்து சேகரிக்கப்பட்டு தனிமைப்படுத்தப்பட்டன.
முப்பத்தைந்து எலிகள் ஐந்து குழுக்களாகப் பிரிக்கப்பட்டன (n=7/குழு).குழு 1 என்பது பிபிஎஸ் உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டுக் குழுவாகும்: எலிகள் 100 μl பிபிஎஸ் இன்ட்ராமுஸ்குலர் மற்றும் 3 நாட்களுக்குப் பிறகு கேவேஜ் மூலம் பெற்றன.குழு 2 என்பது G. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டிகளால் பாதிக்கப்பட்ட ஒரு நேர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழுவாகும்: எலிகளுக்கு 100 μl பிபிஎஸ் செலுத்தப்பட்டது, மேலும் 3 நாட்களுக்குப் பிறகு 1.5 x 106 நீர்க்கட்டிகள்/சுட்டிகள் உட்செலுத்தப்பட்டன.மூன்றாவது குழு - பிசிடிஎன்ஏ 3.1 (+) உடன் பிளாஸ்மிட் நோய்த்தடுப்பு, டூடெனனல் நீர்க்கட்டி தொற்றுக்கான கட்டுப்பாட்டுக் குழுவுடன் இணைந்து: எலிகள் 100 μg பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ pcDNA3.1(+)(im) வாய்வழியாக, 1.5×106 நீர்க்கட்டிகள்/மவுஸ் 3 ஆகியவற்றைப் பெற்றன. நாட்களில்.குழுக்கள் 4 மற்றும் 5 ஆனது ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி நோய்த்தொற்றுடன் இணைந்து pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine plasmid அல்லது pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine plasmid.சோதனைக் குழு: எலிகள் 100 μg pcDNA3 பெற்றன.1(+)-ஜியார்டின் பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ (இம்), பின்னர் 3 நாட்களுக்குப் பிறகு, 1.5 × 106 நீர்க்கட்டிகள்/மவுஸ் கேவேஜ் வழியாக செலுத்தப்பட்டது.குழாய் வழியாக ஜி.டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி அறிமுகப்படுத்தப்பட்ட பிறகு ஒவ்வொரு எலியின் உடல் எடையும் கண்காணிக்கப்பட்டது.ஒட்டுண்ணி சுமை அளவீடுகள் மற்றும் HE கறை பகுப்பாய்விற்காக புதிய டியோடெனம் சேகரிக்கப்பட்டது.
முன்னர் வெளியிடப்பட்ட செயல்முறையின் படி ஹிஸ்டோபோதாலஜிக்கல் மாற்றங்கள் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன [30].புதிய டியோடெனம் திசு செல் ஃபிக்ஸேட்டிவ் மூலம் சரி செய்யப்பட்டது, பாரஃபினில் உட்பொதிக்கப்பட்டு, 4 μm பிரிவுகளாக வெட்டப்பட்டது, H&E உடன் படிந்து, ஒளி நுண்ணோக்கின் கீழ் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.ஏழு சுயாதீன எலிகளிலிருந்து ஏழு திசுப் பிரிவுகளில் உள்ள பிரதிநிதித்துவ நோயியல் மாற்றங்கள் சிகிச்சையைப் பற்றி அறியாத ஒரு நோயியல் நிபுணரால் மதிப்பீடு செய்யப்பட்டு 200x உருப்பெருக்கத்தில் கைப்பற்றப்பட்டன.வில்லியின் நீளம் மற்றும் கிரிப்ட்களின் ஆழம் முன்பு விவரிக்கப்பட்ட முறைகளுக்கு ஏற்ப அளவிடப்பட்டது.
விட்ரோ மற்றும் இன் விவோ முடிவுகள் மும்மடங்காகப் பெறப்பட்டன.கிராப் பேட் ப்ரிஸம் 7.00 (கிராப்பேட் மென்பொருள் இன்க்., லா ஜொல்லா, சிஏ, அமெரிக்கா) பயன்படுத்தி வரைபடங்கள் உருவாக்கப்பட்டன.இரண்டு குழுக்களுக்கிடையேயான வேறுபாடுகள் t-test மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன, அதே சமயம் ≥3 குழுக்களுக்கு இடையேயான வேறுபாடுகள் SPSS மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி (பதிப்பு 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA) மாறுபாட்டின் ஒரு வழி பகுப்பாய்வு (ANOVA) மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.லெவெனின் சோதனையைப் பயன்படுத்தி மாறுபாட்டின் ஒரே மாதிரியான தன்மைக்காக தரவு பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது, அதைத் தொடர்ந்து போன்ஃபெரோனியின் பிந்தைய தற்காலிக சோதனை (பி).முக்கியத்துவம் P <0.05, P <0.01, மற்றும் P <0.001 (குறிப்பிடத்தக்கது இல்லை [ns]) (P>0.05) என வெளிப்படுத்தப்படுகிறது.
கியோட்டோ என்சைக்ளோபீடியா ஆஃப் ஜீன்ஸ் அண்ட் ஜீனோம்ஸில் (KEGG) GEV புரோட்டியோமிக்ஸ் பற்றிய எங்கள் முந்தைய பகுப்பாய்வு, அழற்சி சமிக்ஞை பாதைகளை செயல்படுத்துவதில் பல இலக்குகள் ஈடுபடக்கூடும் என்பதைக் காட்டுகிறது [13].நாங்கள் இரண்டு நம்பிக்கைக்குரிய இலக்குகளைத் தேர்ந்தெடுத்தோம், ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டின்கள், இந்த மூலக்கூறுகளைப் பெருக்கி, pcDNA3.1(+) யூகாரியோடிக் எக்ஸ்பிரஷன் வெக்டரை உருவாக்க அவற்றைப் பயன்படுத்துகிறோம்.வரிசைப்படுத்திய பிறகு, மறுசீரமைப்பு pcDNA3.1(+)-alpha-2 மற்றும் alpha-7.3 giardine வெளிப்பாடு பிளாஸ்மிட்கள் முதன்மை சுட்டி பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களாக மாற்றப்பட்டன, மேலும் அழற்சியின் காஸ்பேஸ்-1 p20 சிக்னேச்சர் புரதம் (செயல்படுத்தப்பட்ட காஸ்பேஸ்-1 இன் துண்டு) அடையாளம் காணப்பட்டது. வீக்கத்தைத் தூண்டக்கூடிய முக்கிய மூலக்கூறுகளை தெளிவுபடுத்துகிறது.ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டின்கள் GEV போன்ற p20 காஸ்பேஸ்-1 வெளிப்பாட்டைத் தூண்டும் என்று முடிவுகள் காட்டுகின்றன.சிகிச்சை அளிக்கப்படாத எதிர்மறை கட்டுப்பாடு (பிபிஎஸ் மட்டும்) மற்றும் பிளாஸ்மிட் கட்டுப்பாடு pcDNA3.1(+) (படம் 1) ஆகியவற்றில் காஸ்பேஸ்-1 செயல்படுத்தலில் எந்த விளைவும் காணப்படவில்லை.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 மற்றும் alpha-7.3 giardins மூலம் p20 காஸ்பேஸ்-1 செயல்பாட்டின் அளவீடு.மறுசீரமைப்பு யூகாரியோடிக் வெளிப்பாடு பிளாஸ்மிட்கள் pcDNA3.1(+)-alpha-2 மற்றும் alpha-7.3 giardines (ஒவ்வொரு லேனுக்கும் மேலே) முதன்மை மவுஸ் பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களாக மாற்றப்பட்டன மற்றும் கலாச்சார சூப்பர்நேட்டண்டுகள் 24 மணி நேரம் கழித்து அறுவடை செய்யப்பட்டன.கையொப்பம் காஸ்பேஸ்-1 p20 அழற்சி புரதத்தின் வெளிப்பாடு அளவை அளவிட மேற்கத்திய ப்ளாட்டிங் பயன்படுத்தப்பட்டது.PBS-மட்டும் சிகிச்சை குழு (லேன் C) மற்றும் pcDNA3.1(+) மோனோதெரபி குழு (pcDNA3.1 லேன்) ஆகியவை எதிர்மறைக் கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்பட்டன, மேலும் GEV சிகிச்சைக் குழு நேர்மறைக் கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்பட்டது.ஒவ்வொரு புரதத்திலும் ஒரு ஹிஸ்டைடின் குறிச்சொல்லைக் கண்டறிவதன் மூலம் மறுசீரமைப்பு புரதத்தின் வெளிப்பாடு உறுதிப்படுத்தப்பட்டது, மேலும் எதிர்பார்க்கப்படும் புரதப் பட்டைகள் ஆல்பா-2 ஜியார்டின் (38.2 kDa) மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டின் (37.2 kDa) ஆகும்.GEV, ஜியார்டியா டியோடெனம் எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் வெசிகிள்ஸ், pcDNA3.1(+), EcoRV-Linearized vector, SUP, supernatant
ஆல்பா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன் p20 காஸ்பேஸ்-1 வெளிப்பாட்டைத் தூண்டுகிறதா மற்றும் ஹோஸ்ட் NLRP3 இன் இன்ஃப்ளமேட்டரி ரெஸ்பான்ஸ், pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine மற்றும் pcDNA3.1(+)-ஆல்ஃபாவைச் செயல்படுத்துவதில் பங்கு வகிக்கின்றனவா என்பதைத் தீர்மானிக்க. -7.3 ஜியார்டின் மறுசீரமைப்பு பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏவுடன் முதன்மை மவுஸ் பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களுக்கு மாற்றப்பட்டது, மேலும் முக்கிய அழற்சி புரதங்களின் வெளிப்பாடு, உள்ளூர்மயமாக்கல் மற்றும் ஒலிகோமரைசேஷன் அளவுகள் NLRP3 தீர்மானிக்கப்பட்டது.இந்த பரிசோதனையில், GEV நேர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழுவாக பயன்படுத்தப்பட்டது, மேலும் எந்த சிகிச்சை குழுவும் (PBS மட்டும்) அல்லது pcDNA3.1(+) இடமாற்ற சிகிச்சை குழு எதிர்மறை குழுவாக இருந்தது.GEV குழுவில் உள்ளதைப் போலவே, ஜியார்டின் pcDNA3.1(+)-alpha-2 மற்றும் giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ஆகியவற்றின் மறுசீரமைப்பு பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ ஆகியவை NLRP3, சார்பு IL-1β மற்றும் நெறிப்படுத்தலுக்கு வழிவகுத்தன என்று முடிவுகள் காட்டுகின்றன. procaspase-1 மற்றும் caspase-1 செயல்படுத்தல் (படம் 2a).கூடுதலாக, இரண்டு ஜியார்டின்களும் குறிப்பிடத்தக்க IL-1β சுரப்பைத் தூண்டின (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.00 );ஆல்பா-7.3 ஜியார்டின்: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (படம் 2b).பெரும்பாலான ஏஎஸ்சி புரதங்கள் பிசிடிஎன்ஏ3.1(+)-ஆல்ஃபா-2 அல்லது பிசிடிஎன்ஏ3.1(+)-ஆல்ஃபா-க்கு மாறாக, சிகிச்சை இல்லாத குழுவில் அல்லது pcDNA3.1(+) பிளாஸ்மிட்டுடன் மாற்றப்பட்ட சிகிச்சைக் குழுவில் மோனோமெரிக் ஆகும். 7.3 ஜியார்டின்.ASC ஒலிகோமரைசேஷன் GEV நேர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழு அல்லது குழுவின் மறுசீரமைப்பு பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏவில் ஏற்பட்டது, இது ஒலிகோமெரிக் வடிவத்தைக் காட்டுகிறது (படம் 2c).ஆல்பா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7,3 ஜியார்டைன் ஆகியவை என்எல்ஆர்பி3 அழற்சியை செயல்படுத்துவதைத் தூண்டும் என்று இந்த ஆரம்பத் தகவல்கள் தெரிவிக்கின்றன.ASC மற்றும் NLRP3 இன் உள்ளூர்மயமாக்கல் பற்றிய அடுத்தடுத்த இம்யூனோஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகள், எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டுக் குழுவில், ASC புரதம் சைட்டோபிளாசம் முழுவதும் சிதறி, ஜியார்டின் அல்லது pcDNA3 உடன் pcDNA3.1(+)-alpha-2 ஐ தூண்டும்போது புள்ளி சமிக்ஞையாகத் தோன்றியது.1(+)-ஆல்ஃபா-7,3 ஜியார்டின் குழு அல்லது GEV நேர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழு (படம் 2d).எதிர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் பிளாஸ்மிட்-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட pcDNA 3.1 குழுக்களில், NLRP3 புரத சமிக்ஞை கண்டறியப்படவில்லை, அதே நேரத்தில் pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine அல்லது pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 க்கு பதில் ஒரு ஒளிரும் சமிக்ஞை புள்ளி. கண்டறியப்பட்டது..ஜியார்டின் சைட்டோபிளாஸில் அல்லது HEV இன் தூண்டுதலின் போது காணப்படுகிறது (படம் 2e).ஜி. டியோடெனலிஸ் ஜியார்டின் ஆல்பா-2 மற்றும் ஜியார்டின் ஆல்பா-7.3 ஆகியவை மவுஸ் பிரைமரி பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களில் என்எல்ஆர்பி3 அழற்சியை செயல்படுத்துகின்றன என்பதை இந்தத் தரவு மேலும் நிரூபிக்கிறது.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin மற்றும் pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ஆகியவை மவுஸ் பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களில் NLRP3 அழற்சியை செயல்படுத்துகின்றன.மறுசீரமைப்பு யூகாரியோடிக் வெளிப்பாடு பிளாஸ்மிடுகளான pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin மற்றும் pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ஆகியவற்றை முதன்மை முரைன் பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்கள் மற்றும் செல்களாக மாற்றவும் அல்லது வெளிப்பாடு, ஒலிகோமரைசேஷன் பகுப்பாய்வுக்காக 24 மணிநேரத்திற்குள் சூப்பர்நேட்டன்ட்டை அறுவடை செய்யவும் , சுரப்பு.மற்றும் முக்கிய அழற்சி புரதங்களின் உள்ளூர்மயமாக்கல்.PBS-மட்டும் (C) குழு மற்றும் pcDNA3.1(+) ஒற்றை சிகிச்சை குழு ஆகியவை எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டாக பயன்படுத்தப்பட்டன, மேலும் GEV சிகிச்சை குழு நேர்மறை குழுவாக பயன்படுத்தப்பட்டது.NLRP3, சார்பு-IL-1β, ப்ரோ-காஸ்பேஸ்-1 மற்றும் p20 காஸ்பேஸ்-1 உள்ளிட்ட முக்கிய அழற்சி புரதங்கள் NLRP3 ஆகியவை மேற்கத்திய பிளாட்டிங் மூலம் கண்டறியப்பட்டன.b சூப்பர்நேட்டண்டுகளில் IL-1β இன் சுரப்பு அளவுகள் என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பன்ட் மதிப்பீட்டை (ELISA) பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்பட்டது.SPSS மென்பொருள் பதிப்பு 22.0 ஐப் பயன்படுத்தி மாறுபாட்டின் ஒரு வழி பகுப்பாய்வு (ANOVA) மூலம் கட்டுப்பாடு மற்றும் சோதனைக் குழுக்களுக்கு இடையிலான வேறுபாடுகள் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன.**P<0.01 மற்றும் ***P<0.001 குழுக்களுக்கு இடையேயான குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளை நட்சத்திரக் குறியீடுகள் குறிப்பிடுகின்றன.c துகள்களில் உள்ள ASC ஒலிகோமரைசேஷன் அளவுகள் DSS குறுக்கு-இணைப்பு பகுப்பாய்வு மூலம் தீர்மானிக்கப்பட்டது, அதே நேரத்தில் செல் லைசேட்டுகளில் ASC அளவுகள் ஏற்றுதல் கட்டுப்பாட்டாகப் பயன்படுத்தப்பட்டன.d இம்யூனோஃப்ளோரசன்ஸைப் பயன்படுத்தி ISC உள்ளூர்மயமாக்கலின் காட்சிப்படுத்தல்.e இம்யூனோஃப்ளோரசன்ஸ் NLRP3 இன் உள்ளூர்மயமாக்கலைக் காட்சிப்படுத்த பயன்படுத்தப்பட்டது.ASC, அப்போப்டொடிக் புள்ளி போன்ற புரதம்;IL, இன்டர்லூகின்;NLRP3, நியூக்ளியோடைடு-பிணைப்பு ஒலிகோமரைசேஷன் போன்ற ஏற்பி 3;ns, குறிப்பிடத்தக்கதாக இல்லை (P > 0.05)
G. டியோடெனலிஸ் மற்றும் அது சுரக்கும் GEVகள் இரண்டும் NLRP3 அழற்சியை செயல்படுத்துகிறது மற்றும் விட்ரோவில் ஹோஸ்ட் அழற்சி பதில்களை ஒழுங்குபடுத்துகிறது.எனவே, G. டியோடெனலிஸின் நோய்க்கிருமித்தன்மையில் NLRP3 இன் இன்ஃப்ளமேஸமின் பங்கு தெளிவாக இல்லை.இந்த சிக்கலை விசாரிக்க, ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டியால் பாதிக்கப்பட்ட எலிகளுக்கும், ஜி. டியோடெனலிஸ் சிஸ்ட் + எம்.சி.சி.950 இன்ஹிபிட்டர் சிகிச்சையால் பாதிக்கப்பட்ட எலிகளுக்கும் இடையே ஒரு பரிசோதனையை நாங்கள் வடிவமைத்தோம், மேலும் ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி நோயால் பாதிக்கப்பட்டபோது NLRP3 அழற்சி வெளிப்பாடுகளை ஒப்பிட்டுப் பார்த்தோம்.சோதனையின் விரிவான திட்டம் படம் 3a இல் காட்டப்பட்டுள்ளது.வெவ்வேறு சிகிச்சை குழுக்களில் உள்ள எலிகளின் உடல் எடையில் ஏற்படும் மாற்றங்கள் நீர்க்கட்டிகளுடன் தொற்று ஏற்பட்ட பிறகு 7 நாட்களுக்கு கண்காணிக்கப்பட்டன, மேலும் முடிவுகள் படம் 3b இல் காட்டப்பட்டுள்ளன.தூய பிபிஎஸ் மூலம் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​முடிவுகள் (i) ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டியால் பாதிக்கப்பட்ட எலிகளின் உடல் எடை நோய்த்தொற்றுக்குப் பிறகு 3 ஆம் நாளிலிருந்து 7 ஆம் நாள் வரை குறைந்துள்ளது;(ii) MCC950 தடுப்பானுடனான சிகிச்சையானது எலிகளின் உடல் எடையில் குறிப்பிடத்தக்க தாக்கத்தை ஏற்படுத்தவில்லை..ஒற்றை தொற்றுக் குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​MCC950 உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட டூடெனனல் தொற்றுக் குழுவின் BW மாறுபட்ட அளவுகளில் குறைந்துள்ளது (நாள் 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; நாள் 2: ANOVA, F( 3, 24 ) = 0.4602, P<0.0001; நாள் 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; நாள் 4: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052; (3, 24)=0.6497, P=0.0645; நாள் 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; நாள் 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).டூடெனனல் நோய்த்தொற்றின் ஆரம்ப கட்டங்களில் (2-4 நாட்கள்) குறிப்பிடத்தக்க எடை இழப்பிலிருந்து எலிகளை NLRP3 அழற்சி பாதுகாக்கிறது என்பதை இந்தத் தகவல்கள் நிரூபிக்கின்றன.டூடெனனல் லாவேஜ் திரவத்தில் ஜி. டியோடெனலிஸ் ட்ரோபோசோயிட்களைக் கண்டறிவதை நாங்கள் இலக்காகக் கொண்டோம், அதன் முடிவுகள் படம் 3c இல் காட்டப்பட்டுள்ளன.ஜி. டூடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி தொற்றுக் குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​என்.எல்.ஆர்.பி.3 அழற்சியை (t(12) = 2.902, பி = 0.0133) தடுப்பதற்குப் பிறகு டியோடெனத்தில் உள்ள ட்ரோபோசோயிட்களின் எண்ணிக்கை கணிசமாக அதிகரித்தது.பிபிஎஸ் மற்றும் எம்.சி.சி.950 ஆகியவற்றுடன் மட்டும் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட எதிர்மறைக் கட்டுப்பாட்டுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​HE கறை படிந்த டூடெனனல் திசுக்கள் காட்டியது: (i) ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி நோய்த்தொற்றின் விளைவாக டூடெனனல் வில்லி (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ) மற்றும் கிரிப்ட் அட்ராபி (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டிகளால் பாதிக்கப்பட்ட எலிகளின் டூடெனிம் மற்றும் MCC950 தடுப்பான்களுடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டது.டியோடெனல் வில்லி சேதமடைந்து இறந்துவிட்டது (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) அட்ராபி மற்றும் கிரிப்ட் கிளைகளுடன் (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (படம் 3d- f) .G. டூடெனலிஸின் நோய்க்கிருமித்தன்மையைக் குறைப்பதில் NLRP3 அழற்சி ஒரு பங்கு வகிக்கிறது என்று இந்த முடிவுகள் தெரிவிக்கின்றன.
ஜியார்டியா டியோடெனம் நோய்த்தொற்றில் NLRP3 அழற்சியின் பங்கு.எலிகள் டியோடெனோகோகல் நீர்க்கட்டிகள் மூலம் (iv) வெட்டப்பட்டன, பின்னர் MCC950 (ip) உடன் அல்லது இல்லாமல் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டன.PBS அல்லது MCC950 கொண்ட ஒற்றை சிகிச்சை குழுக்கள் கட்டுப்பாடுகளாகப் பயன்படுத்தப்பட்டன.பரிசோதனைக் குழு மற்றும் சிகிச்சை முறை.b பல்வேறு சிகிச்சை குழுக்களில் உள்ள எலிகளின் உடல் எடை 7 நாட்களுக்கு கண்காணிக்கப்பட்டது.SPSS மென்பொருள் பதிப்பு 22.0ஐப் பயன்படுத்தி t-டெஸ்ட் மூலம் G. duodenalis தொற்றுக் குழுவிற்கும் G. duodenalis + MCC950 தொற்று சிகிச்சைக் குழுவிற்கும் உள்ள வேறுபாடு பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் *P<0.05, **P<0.01, அல்லது ***P<0.001 இல் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன.c டூடெனனல் லாவேஜ் திரவத்தில் உள்ள ட்ரோபோசோயிட்களின் எண்ணிக்கையைக் கணக்கிடுவதன் மூலம் ஒட்டுண்ணி சுமை தீர்மானிக்கப்பட்டது.SPSS மென்பொருள் பதிப்பு 22.0ஐப் பயன்படுத்தி t-டெஸ்ட் மூலம் G. duodenalis தொற்றுக் குழுவிற்கும் G. duodenalis + MCC950 தொற்று சிகிச்சைக் குழுவிற்கும் உள்ள வேறுபாடு பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.நட்சத்திரங்கள் *P <0.05 இல் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன.d ஹெமாடாக்சிலின் மற்றும் ஈசின் (H&E) டூடெனனல் ஹிஸ்டோபோதாலஜியின் கறை முடிவுகள்.சிவப்பு அம்புகள் வில்லியின் சேதத்தைக் குறிக்கின்றன, பச்சை அம்புகள் கிரிப்ட்களுக்கு சேதம் என்பதைக் குறிக்கின்றன.அளவுகோல்: 100 μm.e, f டூடெனனல் வில்லஸ் உயரம் மற்றும் மவுஸ் கிரிப்ட் உயரத்தின் புள்ளிவிவர பகுப்பாய்வு.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் *P <0.05 மற்றும் **P <0.01 இல் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன.7 சுயாதீன உயிரியல் சோதனைகளிலிருந்து முடிவுகள் எடுக்கப்பட்டன.BW, உடல் எடை;ig, உள்காஸ்ட்ரிக் விநியோக பாதை;ஐபி, இன்ட்ராபெரிட்டோனியல் டெலிவரி பாதை;ns, குறிப்பிடத்தக்கதாக இல்லை (P > 0.05);பிபிஎஸ், பாஸ்பேட் தாங்கல் உப்பு;WT, காட்டு வகை
IL-1β இன் சுரப்பு அழற்சி செயல்பாட்டின் ஒரு அடையாளமாகும்.ஜி. டியோடெனலிஸ் ஆல்பா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன் ஆகியவை விவோவில் NLRP3 ஹோஸ்ட் அழற்சியை செயல்படுத்துகிறதா என்பதைத் தீர்மானிக்க, நாங்கள் சிகிச்சை அளிக்கப்படாத WT எலிகள் (ஷாம் குழு) மற்றும் NLRP3 அழற்சி-தடுக்கப்பட்ட எலிகள் (MCC950 தடுக்கப்பட்ட சிகிச்சை குழு) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தினோம்.சோதனையின் விரிவான திட்டம் படம் 4a இல் காட்டப்பட்டுள்ளது.பரிசோதனைக் குழுக்களில் பிபிஎஸ், ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி சிகிச்சை, பிசிடிஎன்ஏ3.1 இன் இன்ட்ராமுஸ்குலர் ஊசி, மற்றும் பிசிடிஎன்ஏ3.1(+)-ஆல்ஃபா-2 ஜியார்டின் அல்லது பிசிடிஎன்ஏ3.1-ஆல்ஃபா-7.3 ஜியார்டைன் ஆகியவற்றின் தசைநார் உட்செலுத்துதல் ஆகியவை அடங்கும்.மறுசீரமைப்பு பிளாஸ்மிட்டின் தசைநார் நிர்வாகத்திற்குப் பிறகு 7 வது நாளில், சீரம் சேகரிக்கப்பட்டு ஒவ்வொரு குழுவிலும் IL-1β இன் நிலை தீர்மானிக்கப்பட்டது.படம் 4b இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, MOCK குழுவில்: (i) PBS குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​pcDNA3.1 சிகிச்சையானது IL-1β சுரப்பில் குறிப்பிடத்தக்க தாக்கத்தை ஏற்படுத்தவில்லை (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998), இருப்பினும், IL-β சுரப்பு G. டூடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி குழுவில் (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine மற்றும் pcDNA3 ஆகியவற்றில் கணிசமாக உயர்த்தப்பட்டது.1- ஆல்ஃபா-7.3 ஜியார்டின் இன் இன்ட்ராமுஸ்குலர் ஊசி சீரம் IL-1β அளவுகளை கணிசமாக அதிகரித்தது (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 ஜியார்டைன் pcDNA3.1-alpha-2 ஜியார்டின் இன்ட்ராமுஸ்குலர் ஊசி குழுவில் (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) IL -1β சுரப்பு அதிக அளவில் தூண்டப்பட்டது. .MCC950 சிகிச்சை குழு மற்றும் MOCK குழுவில் உள்ள ஒவ்வொரு குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது: (i) PBS கட்டுப்பாட்டு குழு மற்றும் pcDNA3.1 கட்டுப்பாட்டு குழுவில் உள்ள IL-1β சுரப்பு அளவுகள் MCC950 தடுப்பானைத் தடுத்த பிறகு ஒரு குறிப்பிட்ட அளவிற்குக் குறைந்தன, ஆனால் வித்தியாசம் இல்லை. குறிப்பிடத்தக்க (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950ஐத் தடுத்த பிறகு., IL-1β சுரப்பு G. duodenalis cyst-infected group, pcDNA3.1-alpha-2 giardine group, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine group (G. duodenalis: ANOVA, F(9) ஆகியவற்றில் கணிசமாகக் குறைக்கப்பட்டது. , 58) = 3.540 , பி = 0.0120 ) = 3.540, பி = 0.0164).இந்த முடிவுகள் ஆல்பா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன் ஆகியவை விவோவில் என்எல்ஆர்பி3 இன்ஃப்ளேமசோமை செயல்படுத்துவதற்கு மத்தியஸ்தம் செய்கின்றன.
pcDNA3.1(+)-ஜியார்டின்கள் விவோவில் NLRP3 ஹோஸ்ட் இன்ஃப்ளேமஸமை செயல்படுத்துகிறது.மறுசீரமைப்பு யூகாரியோடிக் வெளிப்பாடு பிளாஸ்மிட் pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine அல்லது pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine மூலம் எலிகளுக்கு நோய்த்தடுப்பு அளிக்கப்பட்டது (IM) பின்னர் MCC950 (ip; MCC950 குழு) அல்லது இல்லை (டம்மி குழு) )PBS அல்லது pcDNA3.1(+) பிளாஸ்மிட் சிகிச்சை குழு எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டாக பயன்படுத்தப்பட்டது, G. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டி சிகிச்சை குழு நேர்மறையான கட்டுப்பாட்டாக பயன்படுத்தப்பட்டது.பரிசோதனைக் குழு மற்றும் சிகிச்சை முறை.b எலிகளில் IL-1β இன் சீரம் அளவுகள் 7 ஆம் நாளில் ELISA மதிப்பீட்டால் அளவிடப்பட்டது.MOCK குழுவில் உள்ள குழுக்களுக்கு இடையேயான வேறுபாடுகள் ஒரு வழி ANOVA ஐப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன, மேலும் MOCK குழுவிற்கும் MCC950 குழுவிற்கும் இடையிலான வேறுபாடுகள் SPSS மென்பொருள் பதிப்பு 22.0 இன் t-test ஐப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன.MOCK குழுவில் உள்ள சிகிச்சை குழுக்களிடையே குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளை நட்சத்திரக் குறியீடுகள் குறிப்பிடுகின்றன, *P<0.05 மற்றும் ***P<0.001;டாலர் குறியீடுகள் ($) MOCK குழுவில் உள்ள ஒவ்வொரு குழுவிற்கும் P<0.05 இல் MCC950 குழுவிற்கும் இடையே குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கிறது.ஏழு சுயாதீன உயிரியல் பரிசோதனைகளின் முடிவுகள்.i, இன்ட்ராமுஸ்குலர் ஊசி, ns, குறிப்பிடத்தக்கதாக இல்லை (P > 0.05)
G. டியோடெனலிஸ் இன்ஃபெக்டிவிட்டியில் NLRP3 ஹோஸ்ட் அழற்சியின் ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டின்-மத்தியஸ்த செயல்பாட்டின் விளைவை ஆராய, நாங்கள் WT C57BL/6 எலிகளைப் பயன்படுத்தினோம் மற்றும் ஆல்பா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைனை செலுத்தினோம்.பிளாஸ்மிட் ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டியின் இரைப்பைக் குழாய் வழியாக 3 நாட்களுக்குப் பிறகு, தசைகளுக்குள் செலுத்தப்பட்டது, அதன் பிறகு எலிகள் 7 நாட்களுக்கு கவனிக்கப்பட்டன.சோதனையின் விரிவான திட்டம் படம் 5a இல் காட்டப்பட்டுள்ளது.ஒவ்வொரு எலியின் உடல் எடையும் ஒவ்வொரு நாளும் அளவிடப்பட்டது, இரைப்பைக் குழாய் மூலம் நிர்வாகத்திற்குப் பிறகு 7 வது நாளில் புதிய டூடெனனல் திசுக்களின் மாதிரிகள் சேகரிக்கப்பட்டன, ட்ரோபோசோயிட்களின் எண்ணிக்கை அளவிடப்பட்டது மற்றும் ஹிஸ்டோபோதாலஜிக்கல் மாற்றங்கள் காணப்பட்டன.படம் 5b இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, உணவளிக்கும் நேரத்தை அதிகரிப்பதன் மூலம், ஒவ்வொரு குழுவிலும் உள்ள எலிகளின் BW படிப்படியாக அதிகரித்தது.ஜி. டியோடெனலிஸ் நீர்க்கட்டிகளின் உள்காஸ்ட்ரிக் நிர்வாகத்திற்குப் பிறகு 3 வது நாளில் எலிகளின் MT குறையத் தொடங்கியது, பின்னர் படிப்படியாக அதிகரித்தது.ஆல்ஃபா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா7.3 ஜியார்டின் ஆகியவற்றின் தசைநார் ஊசி மூலம் தூண்டப்பட்ட NLRP3 அழற்சியை செயல்படுத்துவது எலிகளின் எடை இழப்பை கணிசமாகக் குறைத்தது (நாள் 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 39) = 1. = 0 .9754 நாள் 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 நாள் 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; நாள் 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; நாள் 3 : pcDNA3.1-alpha-2 giardine 4.30 , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, நாள் 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, நாள் 5: pcDNA3.1-alpha 2 ஜியார்டின், ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 நாள் 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 நாள் 6: pcDNA alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, நாள் 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;நாள் 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 நாள் 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.5369, P <0.0001).ஒட்டுண்ணி சுமை டியோடினத்தில் மதிப்பிடப்பட்டது (படம் 5 சி).சிகிச்சை அளிக்கப்படாத நேர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் வெற்று pcDNA3.1 திசையன் மூலம் செலுத்தப்பட்ட குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​α-2 ஜியார்டின் மற்றும் α-7,3 ஜியார்டைன் (pcDNA3.1-ஆல்ஃபா) உட்செலுத்தப்பட்ட குழுக்களில் G. duodenalis trophozoites எண்ணிக்கை கணிசமாகக் குறைக்கப்பட்டது. -2 ஜியார்டின் : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).கூடுதலாக, ஜியார்டின் ஆல்ஃபா-7.3, ஜியார்டைன் ஆல்ஃபா-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) ஐ விட எலிகளில் அதிக பாதுகாப்புடன் இருந்தது.HE கறையின் முடிவுகள் அத்தியில் காட்டப்பட்டுள்ளன.5d-f.ஆல்ஃபா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன் உட்செலுத்தப்பட்ட எலிகள் குறைவான டூடெனனல் திசுப் புண்களைக் கொண்டிருந்தன, அவை ஜி. டியோடெனலிஸ் மற்றும் ஜி. டியோடெனலிஸ் ஊசி மூலம் செலுத்தப்பட்ட எலிகளுடன் ஒப்பிடும்போது வில்லஸ் சேதத்தால் வெளிப்படுகிறது.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 அல்லது P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, = 0.0028 அல்லது P = 0.0055) மற்றும் குறைக்கப்பட்ட கிரிப்ட் அட்ராபி (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 அல்லது P = 0.0158; pcDNA3.3.1-alphaardine:ANO. , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 அல்லது P = 0.0191).இந்த முடிவுகள் ஆல்பா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7,3 ஜியார்டைன் ஆகியவை விவோவில் என்எல்ஆர்பி3 அழற்சியை செயல்படுத்துவதன் மூலம் ஜி.டியோடெனலிஸின் தொற்றுநோயைக் குறைக்கின்றன.
ஜி. டியோடெனலிஸ் நோய்த்தொற்றில் pcDNA3.1(+)-ஜியார்டின்களின் பங்கு.மறுசீரமைப்பு யூகாரியோடிக் வெளிப்பாடு பிளாஸ்மிட்கள் pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine அல்லது pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine மூலம் எலிகளுக்கு நோய்த்தடுப்பு அளிக்கப்பட்டது.பிபிஎஸ் குழு மற்றும் pcDNA3.1(+) + டூடெனனல் நீர்க்கட்டி சிகிச்சை குழு எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழுக்களாகவும், டூடெனனல் நீர்க்கட்டி சிகிச்சை குழு நேர்மறை கட்டுப்பாட்டு குழுவாகவும் பயன்படுத்தப்பட்டது.பரிசோதனைக் குழு மற்றும் சிகிச்சை முறை.b பல்வேறு சிகிச்சை குழுக்களில் உள்ள எலிகளின் MT 7 நாட்களுக்கு பிந்தைய சவாலுக்கு கண்காணிக்கப்பட்டது.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் G. duodenalis குழு மற்றும் pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine குழு, *P <0.05, **P <0.01, மற்றும் ***P <0.001 ஆகிய குழுக்களுக்கு இடையே குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிப்பிடுகின்றன;டாலர் குறி ($) என்பது G. டூடெனலிஸ் மற்றும் pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 jardine குழு, $$P<0.01 மற்றும் $$$P<0.001 ஆகியவற்றின் ஒவ்வொரு குழுவிற்கும் இடையே குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாட்டைக் குறிக்கிறது.c டியோடெனத்திலிருந்து (3 செ.மீ. நீளம்) 1 மில்லி டியோடெனல் லாவேஜில் உள்ள ட்ரோபோசோயிட்டுகளின் எண்ணிக்கையைக் கணக்கிடுவதன் மூலம் ஒட்டுண்ணி சுமை தீர்மானிக்கப்படுகிறது மற்றும் ஒரு செ.மீ.க்கு ஒட்டுண்ணிகளின் எண்ணிக்கையாக வெளிப்படுத்தப்படுகிறது.SPSS மென்பொருள் பதிப்பு 22.0 ஐப் பயன்படுத்தி G. டூடெனலிஸ் தொற்றுக் குழு, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine குழு மற்றும் pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ஜியார்டின் குழு ஆகியவற்றுக்கு இடையேயான வேறுபாடுகள் ஒருவழி ANOVA ஆல் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் **P<0.01 மற்றும் ***P<0.001 இல் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன.டியோடினத்தில் ஹிஸ்டோபோதாலஜிக்கல் மாற்றங்கள்.சிவப்பு அம்புகள் வில்லியின் சேதத்தைக் குறிக்கின்றன, பச்சை அம்புகள் கிரிப்ட்களுக்கு சேதம் என்பதைக் குறிக்கின்றன.அளவுகோல்: 100 μm.e, f மவுஸ் டூடெனனல் வில்லஸ் உயரம் (e) மற்றும் கிரிப்ட் உயரம் (f) ஆகியவற்றின் புள்ளிவிவர பகுப்பாய்வு.SPSS மென்பொருள் பதிப்பு 22.0 ஐப் பயன்படுத்தி ஒரு வழி ANOVA மூலம் படம் 1d இல் உள்ள குழுக்களுக்கு இடையே உள்ள வேறுபாடுகள் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன.நட்சத்திரக் குறியீடுகள் *P <0.05 மற்றும் **P <0.01 இல் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளைக் குறிக்கின்றன.ஏழு சுயாதீன உயிரியல் பரிசோதனைகளின் முடிவுகள்.ns, குறிப்பிடத்தக்கதாக இல்லை (P > 0.05)
ஜியார்டியா டியோடெனம் என்பது ஜியார்டியாசிஸை ஏற்படுத்தும் மனிதர்கள் மற்றும் பிற பாலூட்டிகளின் நன்கு அறியப்பட்ட குடல் ஒட்டுண்ணி ஆகும்.2004 ஆம் ஆண்டில், WHO புறக்கணிக்கப்பட்ட நோய்கள் முன்முயற்சியில் இது 6 ஆண்டுகளில் அதிகமாக பரவியதால், குறிப்பாக குறைந்த சமூகப் பொருளாதார நிலையில் உள்ள சமூகங்களில் சேர்க்கப்பட்டது [32].ஜி.டியோடெனலிஸ் நோய்த்தொற்றுக்கான நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியில் உள்ளார்ந்த நோயெதிர்ப்பு அமைப்பு முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது.மவுஸ் மேக்ரோபேஜ்கள் புற-செல்லுலார் பொறிகளை வெளியிடுவதன் மூலம் ஜி. டியோடெனலிஸை மூழ்கடித்து அழிப்பதாக அறிவிக்கப்பட்டுள்ளது [33].எங்களின் முந்தைய ஆய்வுகள், G. duodenalis, ஒரு ஆக்கிரமிப்பு அல்லாத புற-செல்லுலார் ஒட்டுண்ணி, p38 MAPK, ERK, NF-κB p65 மற்றும் NLRP3 இன் இன்ஃப்ளமேட்டரி சிக்னலிங் பாதைகளை மவுஸ் மேக்ரோபேஜ்களில் செயல்படுத்தி, ஹோஸ்ட் இன்ஃப்ளமேட்டரி பதில்களைக் கட்டுப்படுத்துகிறது, மேலும் வெளியிடப்பட்ட GEV இந்த செயல்முறையை மேம்படுத்தலாம்.13], 24].இருப்பினும், GEV இல் NLRP3 அழற்சி-ஒழுங்குபடுத்தப்பட்ட வீக்கத்தில் ஈடுபட்டுள்ள சரியான PAMPகள் மற்றும் ஜியார்டியாசிஸில் NLRP3 அழற்சியின் பங்கு தெளிவுபடுத்தப்பட உள்ளது.இந்த இரண்டு கேள்விகளுக்கு வெளிச்சம் போட, நாங்கள் இந்த ஆய்வை நடத்தினோம்.
NLRP3 அழற்சியானது நோயெதிர்ப்பு உயிரணுக்களின் சைட்டோபிளாஸில் அமைந்துள்ளது மற்றும் யூரிக் அமில படிகங்கள், நச்சுகள், பாக்டீரியாக்கள், வைரஸ்கள் மற்றும் ஒட்டுண்ணிகள் போன்ற பல்வேறு துகள்களால் செயல்படுத்தப்படலாம்.பாக்டீரியா ஆய்வுகளில், நச்சுகள் அழற்சி உணரிகளை செயல்படுத்தும் முக்கிய PAMP களாக அடையாளம் காணப்பட்டுள்ளன, இது வீக்கம் மற்றும் உயிரணு இறப்புக்கு வழிவகுக்கிறது [34].ஸ்டேஃபிலோகோகஸ் ஆரியஸ் [35] மற்றும் எஸ்கெரிச்சியா கோலி [36], என்டோரோடாக்சின் (NHE) [37] இலிருந்து ஹெமோலிசின் பிஎல் (HBL) போன்ற சில கட்டமைப்பு ரீதியாக வேறுபட்ட நச்சுகள், NLRP3 அழற்சியின் செயல்பாட்டைத் தூண்டுகின்றன.SARS-COV-2 உறை (E) புரதம் [38] மற்றும் Zika வைரஸ் NS5 புரதம் [39] போன்ற வைரஸ் புரதங்கள் NLRP3 ஏற்பியால் அங்கீகரிக்கப்பட்ட முக்கியமான PAMPகள் என்று வைரஸ் ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன.ஒட்டுண்ணி ஆய்வுகளில், பல ஒட்டுண்ணிகள் டோக்ஸோபிளாஸ்மா கோண்டி, டிரிகோமோனாஸ் வஜினலிஸ் [40], டிரிபனோசோமா க்ரூஸி [41] மற்றும் லீஷ்மேனியா [42] போன்ற ஹோஸ்ட் இன்ஃப்ளமேஸம் ஆக்டிவேஷனுடன் தொடர்புடையதாகக் கூறப்படுகிறது.டோக்ஸோபிளாஸ்மா கோண்டியின் வீரியத்துடன் தொடர்புடைய அடர்த்தியான கிரானுல் புரதங்கள் GRA35, GRA42 மற்றும் GRA43 ஆகியவை லூயிஸ் எலி மேக்ரோபேஜ்களில் பைரோப்டோசிஸைத் தூண்டுவதற்குத் தேவைப்படுகின்றன [43].கூடுதலாக, சில லீஷ்மேனியா ஆய்வுகள், ஒட்டுண்ணி சவ்வு லிபோபாஸ்போகிளைகான் [44] அல்லது துத்தநாக மெட்டாலோபுரோடீஸ் [45] போன்ற NLRP3 அழற்சியில் ஈடுபடும் தனிப்பட்ட மூலக்கூறுகளில் கவனம் செலுத்துகின்றன.அனெக்சின் போன்ற ஆல்பா-ஜியார்டின் குடும்ப மரபணுக்களில், ஆல்பா-1 ஜியார்டின் ஒரு சுட்டி மாதிரியில் ஜி. டியோடெனலிஸுக்கு எதிராக பாதுகாப்பை வழங்கும் சாத்தியமான தடுப்பூசி வேட்பாளராகக் காட்டப்பட்டுள்ளது [18].எங்கள் ஆய்வில், ஜி. டியோடெனலிஸ் வைரஸ் காரணிகளான ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7,3 ஜியார்டைன்களைத் தேர்ந்தெடுத்தோம், அவை ஜியார்டியாவுக்குத் தனித்தன்மை வாய்ந்தவை ஆனால் ஒப்பீட்டளவில் குறைவாகவே தெரிவிக்கப்படுகின்றன.இந்த இரண்டு இலக்கு மரபணுக்களும் pcDNA3.1(+) யூகாரியோடிக் எக்ஸ்பிரஷன் சிஸ்டம் வெக்டரில் வீக்கச் செயல்பாட்டின் பகுப்பாய்வுக்காக குளோன் செய்யப்பட்டன.
எங்கள் சுட்டி மாதிரியில், பிளவுபட்ட காஸ்பேஸ் துண்டுகள் அழற்சி செயல்பாட்டின் குறிப்பான்களாக செயல்படுகின்றன.தூண்டுதலின் பேரில், NLRP3 ASC உடன் தொடர்பு கொள்கிறது, ப்ரோகாஸ்பேஸ்களை நியமிக்கிறது மற்றும் IL-1β மற்றும் சார்பு IL-18 ஐ முதிர்ந்த IL-1β மற்றும் IL-18 ஆக பிரிக்கும் செயலில் உள்ள காஸ்பேஸ்களை உருவாக்குகிறது, முறையே -18.அழற்சி காஸ்பேஸ்கள் (காஸ்பேஸ்-1, -4, -5 மற்றும் -11) என்பது சிஸ்டைன் புரோட்டீஸின் பாதுகாக்கப்பட்ட குடும்பமாகும், அவை உள்ளார்ந்த பாதுகாப்பிற்கு முக்கியமானவை மற்றும் வீக்கம் மற்றும் திட்டமிடப்பட்ட உயிரணு இறப்பில் ஈடுபட்டுள்ளன [46].காஸ்பேஸ்-1 ஆனது கேனானிகல் இன்ஃப்ளெமசோம்களால் [47] செயல்படுத்தப்படுகிறது, அதே சமயம் காஸ்பேஸ்கள்-4, -5 மற்றும் -11 ஆகியவை வித்தியாசமான அழற்சிகள் [48] உருவாகும் போது பிளவுபடுகின்றன.இந்த ஆய்வில், நாங்கள் மவுஸ் பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களை ஒரு மாதிரியாகப் பயன்படுத்தினோம் மற்றும் ஜி. டியோடெனலிஸ் நோய்த்தொற்றின் ஆய்வுகளில் ஹோஸ்ட் என்எல்ஆர்பி3 அழற்சியை செயல்படுத்துவதற்கான குறிப்பானாக p20 காஸ்பேஸ்-1 கிளீவ்டு காஸ்பேஸ்-1 ஐ ஆராய்ந்தோம்.பல ஆல்பா-ஜியார்டின்கள் வீக்கத்தின் வழக்கமான செயல்பாட்டிற்கு காரணம் என்று முடிவுகள் காட்டுகின்றன, இது பாக்டீரியா மற்றும் வைரஸ்களில் ஈடுபடும் முக்கிய வைரஸ் மூலக்கூறுகளின் கண்டுபிடிப்புடன் ஒத்துப்போகிறது.எவ்வாறாயினும், எங்கள் ஆய்வு ஒரு பூர்வாங்கத் திரை மட்டுமே மற்றும் கிளாசிக்கல் அல்லாத அழற்சிகளை செயல்படுத்தக்கூடிய பிற மூலக்கூறுகள் உள்ளன, ஏனெனில் எங்கள் முந்தைய ஆய்வில் G. டியோடெனலிஸ் தொற்று [13] இல் கிளாசிக்கல் மற்றும் கிளாசிக்கல் அல்லாத அழற்சிகள் உள்ளன.உருவாக்கப்படும் p20 காஸ்பேஸ்-1 ஆனது NLRP3 அழற்சியுடன் தொடர்புடையதா என்பதை மேலும் தீர்மானிக்க, முக்கிய மூலக்கூறு புரத வெளிப்பாடு நிலைகள் மற்றும் ASC ஒலிகோமரைசேஷன் அளவுகளைத் தீர்மானிக்க ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டின்களை மவுஸ் பெரிட்டோனியல் மேக்ரோபேஜ்களாக மாற்றினோம். அழற்சி NLRP3.எங்கள் முடிவுகள் Manko-Prykhoda மற்றும் பலர்., G. muris அல்லது E. coli EPEC விகாரங்களைக் கொண்ட Caco-2 செல்களைத் தூண்டுவது மட்டுமே NLRP3, ASC மற்றும் caspase-1 ஆகியவற்றின் ஒளிர்வுத் தீவிரத்தை அதிகரிக்கும் என்று அறிக்கை செய்தவர். குறிப்பிடத்தக்க வகையில் இல்லாவிட்டாலும், G. muris மற்றும் E. coli ஆகியவற்றின் காஸ்டிமுலேஷன் எப்படி மூன்று புரதங்களின் அளவை அதிகரித்தது [49].ஜியார்டியா இனங்கள், செல் கோடுகள் மற்றும் முதன்மை செல்கள் ஆகியவற்றின் தேர்வில் உள்ள வேறுபாடுகளால் இந்த முரண்பாடு இருக்கலாம்.5 வார வயதுடைய பெண் WT C57BL/6 எலிகளில் MCC950 ஐப் பயன்படுத்தி விவோ மதிப்பீடுகளிலும் நாங்கள் செய்தோம், அவை G. டூடெனலிஸால் அதிகம் பாதிக்கப்படுகின்றன.MCC950 என்பது ஒரு சக்திவாய்ந்த மற்றும் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட சிறிய மூலக்கூறு NLRP3 தடுப்பானாகும், இது நானோமொலார் செறிவுகளில் நியமன மற்றும் நியமனமற்ற NLRP3 செயல்படுத்தலைத் தடுக்கிறது.MCC950 NLRP3 செயல்பாட்டைத் தடுக்கிறது, ஆனால் AIM2, NLRC4 மற்றும் NLRP1 அழற்சி பாதைகள் அல்லது TLR சமிக்ஞை பாதைகள் [27] ஆகியவற்றின் செயல்பாட்டை பாதிக்காது.MCC950 NLRP3 செயல்படுத்தலைத் தடுக்கிறது ஆனால் NLRP3 துவக்கம், K+ வெளியேற்றம், Ca2+ இன்ஃப்ளக்ஸ் அல்லது NLRP3 மற்றும் ASC இடையேயான தொடர்பு ஆகியவற்றைத் தடுக்காது;அதற்கு பதிலாக, இது ASC ஒலிகோமரைசேஷனை தடுப்பதன் மூலம் NLRP3 அழற்சியை செயல்படுத்துவதைத் தடுக்கிறது [27].எனவே, ஜியார்டின் ஊசிக்குப் பிறகு NLRP3 அழற்சியின் பங்கைத் தீர்மானிக்க, இன் விவோ ஆய்வில் MCC950 ஐப் பயன்படுத்தினோம்.செயல்படுத்தப்பட்ட காஸ்பேஸ்-1 p10, அழற்சிக்கு எதிரான சைட்டோகைன்கள் சார்பு-IL-1β மற்றும் சார்பு-IL-18 ஐ முதிர்ந்த IL-1β மற்றும் IL-18 [50] ஆக பிரிக்கிறது.இந்த ஆய்வில், MCC950 உடன் அல்லது இல்லாமல் ஜியார்டின்-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட எலிகளில் உள்ள சீரம் IL-1β அளவுகள் NLRP3 அழற்சி செயல்படுத்தப்பட்டதா என்பதற்கான குறிகாட்டியாகப் பயன்படுத்தப்பட்டது.எதிர்பார்த்தபடி, MCC950 சிகிச்சையானது சீரம் IL-1β அளவைக் கணிசமாகக் குறைத்தது.ஜி. டியோடெனலிஸ் ஜியார்டின் ஆல்ஃபா-2 மற்றும் ஜியார்டின் ஆல்ஃபா-7.3 ஆகியவை என்எல்ஆர்பி3 மவுஸ் இன்ஃப்ளேமஸமைச் செயல்படுத்த முடியும் என்பதை இந்தத் தரவு தெளிவாக நிரூபிக்கிறது.
கடந்த தசாப்தத்தில் திரட்டப்பட்ட குறிப்பிடத்தக்க தரவு, IL-17A ஆனது G. முரிஸுக்கு எதிரான நோய் எதிர்ப்பு சக்தியின் முதன்மை சீராக்கி, IL-17RA சிக்னலைத் தூண்டுதல், நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு பெப்டைட்களை உருவாக்குதல் மற்றும் நிரப்பு செயல்பாட்டை ஒழுங்குபடுத்துதல் [51] என்பதை நிரூபித்துள்ளது.இருப்பினும், ஜியார்டியா நோய்த்தொற்று இளம் வயதினருக்கு அடிக்கடி ஏற்படுகிறது, மேலும் இளம் எலிகளில் ஜியார்டியா தொற்று அதன் பாதுகாப்பு விளைவை [52] செலுத்த IL-17A பதிலைச் செயல்படுத்தவில்லை என்று தெரிவிக்கப்பட்டுள்ளது, இது மற்ற இம்யூனோமோடூலேட்டரி ஜியார்டியாவைத் தேட ஆராய்ச்சியாளர்களைத் தூண்டுகிறது.ஹெல்மின்த் தொற்றுக்கான வழிமுறைகள்.G. முரிஸ் E. coli EPEC ஆல் NLRP3 அழற்சியை செயல்படுத்த முடியும் என்று சமீபத்திய ஆய்வின் ஆசிரியர்கள் தெரிவித்தனர், இது நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு பெப்டைட்களின் உற்பத்தியை ஊக்குவிக்கிறது மற்றும் அதன் இணைப்பு திறன் மற்றும் குடலில் உள்ள ட்ரோபோசோயிட்களின் எண்ணிக்கையை குறைக்கிறது, இதனால் பெருங்குடலின் தீவிரத்தை குறைக்கிறது. பாக்டீரியாவால் ஏற்படும் நோய்கள் [49].NLRP3 அழற்சி பல்வேறு நோய்களின் வளர்ச்சியில் ஈடுபட்டுள்ளது.செல் இறப்பைத் தவிர்ப்பதற்காக சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா மேக்ரோபேஜ்களில் தன்னியக்கத்தைத் தூண்டுகிறது என்று ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன, மேலும் இந்த செயல்முறை NLRP3 அழற்சியின் செயல்பாட்டைப் பொறுத்தது [53].N. Caninum ஐப் பொறுத்தவரை, NLRP3 இன் வினைத்திறன் ஆக்ஸிஜன் இனங்கள்-மத்தியஸ்தச் செயல்படுத்தல், ஹோஸ்டில் அதன் பிரதிபலிப்பைக் கட்டுப்படுத்துகிறது, இது ஒரு சாத்தியமான சிகிச்சை இலக்காக அமைகிறது [9].சுட்டி எலும்பு மஜ்ஜையிலிருந்து பெறப்பட்ட டென்ட்ரிடிக் செல்களில் NLRP3 அழற்சியின் செயல்பாட்டைத் தூண்டுவதாக Paracoccidioides brasiliensis கண்டறியப்பட்டுள்ளது, இதன் விளைவாக அழற்சி சைட்டோகைன் IL-1β வெளியிடப்படுகிறது, இது ஹோஸ்ட் பாதுகாப்பில் முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது [10].L. amazonensis, L. major, L. braziliensis மற்றும் L. infantum chagasi உட்பட பல லீஷ்மேனியா இனங்கள், மேக்ரோபேஜ்களில் NLRP3 மற்றும் ASC-சார்ந்த காஸ்பேஸ்-1, அத்துடன் லீஷ்மேனியா தொற்று ஆகியவற்றை செயல்படுத்துகின்றன.NLRP3/ASC/caspase-1 மரபணு [11] இல் குறைபாடுள்ள எலிகளில் ஒட்டுண்ணி பிரதிபலிப்பு மேம்படுத்தப்பட்டுள்ளது.ஜாம்போனி மற்றும் பலர்.லீஷ்மேனியா நோய்த்தொற்று மேக்ரோபேஜ்களில் NLRP3 அழற்சியின் செயல்பாட்டைத் தூண்டுவதாகப் புகாரளிக்கப்பட்டுள்ளது, இது உள்செல்லுலார் ஒட்டுண்ணி நகலெடுப்பைக் கட்டுப்படுத்துகிறது.எனவே, லீஷ்மேனியா ஒரு தவிர்க்கும் உத்தியாக NLRP3 செயல்பாட்டைத் தடுக்கலாம்.விவோ ஆய்வுகளில், என்.எல்.ஆர்.பி.3 அழற்சி லீஷ்மேனியாவை நீக்குவதற்கு பங்களித்தது, ஆனால் திசுக்களை பாதிக்கவில்லை [54].மாறாக, ஹெல்மின்தியாசிஸ் ஆய்வுகளில், என்.எல்.ஆர்.பி.3 அழற்சியை செயல்படுத்துவது இரைப்பை குடல் ஹெல்மின்தியாசிஸுக்கு எதிராக ஹோஸ்டின் பாதுகாப்பு நோய் எதிர்ப்பு சக்தியை அடக்கியது [12].உலகளவில் வயிற்றுப்போக்கை ஏற்படுத்தும் முக்கிய பாக்டீரியாக்களில் ஷிகெல்லாவும் ஒன்றாகும்.இந்த பாக்டீரியாக்கள் P2X7 ஏற்பி-மத்தியஸ்த K+ வெளியேற்றம், எதிர்வினை ஆக்ஸிஜன் இனங்கள், லைசோசோமால் அமிலமயமாக்கல் மற்றும் மைட்டோகாண்ட்ரியல் சேதம் மூலம் IL-1β உற்பத்தியைத் தூண்டலாம்.NLRP3 அழற்சியானது ஷிகெல்லாவிற்கு எதிரான மேக்ரோபேஜ்களின் பாகோசைடோசிஸ் மற்றும் பாக்டீரிசைடு செயல்பாட்டை எதிர்மறையாக கட்டுப்படுத்துகிறது [55].பிளாஸ்மோடியத்தால் பாதிக்கப்பட்ட AIM2, NLRP3 அல்லது காஸ்பேஸ்-1 குறைபாடுள்ள எலிகள் டைப் 1 இன்டர்ஃபெரானை அதிக அளவில் உற்பத்தி செய்வதாகவும், பிளாஸ்மோடியம் தொற்றுக்கு அதிக எதிர்ப்புத் தன்மையுடையதாகவும் இருப்பதாக பிளாஸ்மோடியம் ஆய்வுகள் காட்டுகின்றன [56].இருப்பினும், எலிகளில் NLRP3 அழற்சியின் நோய்க்கிருமி செயல்பாட்டைத் தூண்டுவதில் ஆல்பா-2 ஜியார்டின் மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டின் பங்கு தெளிவாக இல்லை.
இந்த ஆய்வில், MCC950 ஆல் NLRP3 அழற்சியைத் தடுப்பது BW ஐக் குறைத்தது மற்றும் எலிகளில் உள்ள குடல் கழுவும் திரவத்தில் ட்ரோபோசோயிட்களின் எண்ணிக்கையை அதிகரித்தது, இதன் விளைவாக டூடெனனல் திசுக்களில் மிகவும் கடுமையான நோயியல் மாற்றங்கள் ஏற்படுகின்றன.ஆல்ஃபா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன் ஹோஸ்ட் மவுஸ் NLRP3 அழற்சியை செயல்படுத்துகிறது, சுட்டி உடல் எடையை அதிகரிக்கிறது, குடல் கழுவும் திரவத்தில் உள்ள ட்ரோபோசோயிட்களின் எண்ணிக்கையை குறைக்கிறது மற்றும் நோயியல் டூடெனனல் புண்களைக் குறைக்கிறது.இந்த முடிவுகள் ஜி. டியோடெனலிஸ் ஆல்ஃபா-2 ஜியார்டைன் மற்றும் ஆல்பா-7,3 ஜியார்டைன் வழியாக என்எல்ஆர்பி3 ஹோஸ்ட் இன்ஃப்ளமேஸமை செயல்படுத்தி, எலிகளில் ஜி.டியோடெனலிஸின் நோய்க்கிருமித் தன்மையைக் குறைக்கும்.
ஒட்டுமொத்தமாக, ஆல்பா-2 மற்றும் ஆல்பா-7.3 ஜியார்டைன்கள் என்எல்ஆர்பி3 ஹோஸ்ட் இன்ஃப்ளேமஸம் செயல்பாட்டைத் தூண்டுகிறது மற்றும் எலிகளில் ஜி. டியோடெனலிஸின் தொற்றுநோயைக் குறைக்கிறது என்பதை எங்கள் முடிவுகள் நிரூபிக்கின்றன.எனவே, இந்த மூலக்கூறுகள் ஜியார்டியாசிஸ் தடுப்புக்கான இலக்குகளாக உள்ளன.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
லியாங் AKS, லியாங் AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.ஜியார்டியாசிஸ்: ஒரு கண்ணோட்டம்.Pat Inflamm மருந்துகளுக்கு ஒவ்வாமை இருப்பது சமீபத்தில் தெரியவந்தது.2019;13:134–43.
எஸ்கோபெடோ ஏஏ, சிமர்மன் எஸ். ஜியார்டியாசிஸ்: மருந்தியல் சிகிச்சையின் ஆய்வு.ஒரு மருந்தாளரின் நிபுணர் கருத்து.2007;8: 1885–902.
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng.ஜியார்டியாசிஸ், மருந்து எதிர்ப்பு மற்றும் புதிய இலக்குகளின் கண்டுபிடிப்பு.கோளாறு மருந்து இலக்குகளை பாதிக்கிறது.2010;10:295–302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, முதலியன NLRP3 அழற்சி மற்றும் அழற்சி நோய்கள்.ஆக்சைடு மெட் செல் லாங்கேவ்.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. குடல் அழற்சி மற்றும் புற்றுநோயில் அழற்சியின் பங்கு.காஸ்ட்ரோஎன்டாலஜி.2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. நோயெதிர்ப்பு சகிப்புத்தன்மை மற்றும் குடல் அழற்சியின் குறுக்கு வழியில் நியதி மற்றும் வித்தியாசமான NLRP3 அழற்சியை செயல்படுத்துதல்.முன் நோய் எதிர்ப்பு சக்தி.2017;8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.ROS-மத்தியஸ்தம் கொண்ட NLRP3 அழற்சி செயல்படுத்தல் N. கேனினம் நோய்த்தொற்றின் பிரதிபலிப்பில் ஈடுபட்டுள்ளது.ஒட்டுண்ணி திசையன்.2020;13:449.